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第一章　绪论1

第一节 转基因食品的概况1

一、转基因食品的定义1

二、转基因食品的商业化现状1

三、转基因食品的安全性5

（一）转基因作物的环境安全性5

（二）转基因作物的食品安全性6

（三）转基因食品的安全性评价7

第二节 转基因食品的种类9

一、转基因大豆9

二、转基因玉米11

三、转基因棉花18

四、转基因油菜21

五、转基因马铃薯26

六、转基因番茄27

七、转基因菊苣29

八、转基因亚麻29

九、转基因香瓜30

十、转基因番木瓜30

十一、转基因水稻30

十二、转基因南瓜31

十三、转基因甜菜31

十四、转基因小麦32

十五、转基因向日葵32

十六、转基因扁豆33

第三节 转基因食品检测方法概述33

一、转基因食品的蛋白检测方法34

二、转基因食品的核酸检测方法34

三、转基因食品的其他检测方法35

（一）近红外光谱35

（二）微阵列技术35

第二章　转基因食品检测的质量控制体系36

第一节 样本的采集与处理36

一、抽样36

（一）抽样的基本原则36

（二）抽样数量36

（三）抽样方法38

二、制样方法39

（一）一般规定39

（二）样品的初步处理39

（三）破碎、研磨和缩分39

（四）实验室样品的制备40

三、样品的盛装、标识和运送40

（一）样品的盛装40

（二）样品的标识40

（三）样品的运送40

四、抽样报告41

五、存查样品41

六、健康和安全41

第二节 检测实验室基本硬件要求41

一、样品粉碎区42

二、样品称量区42

三、试剂贮存和准备区42

四、核酸制备区42

五、检测体系配置区42

六、基因扩增区43

七、扩增产物分析区43

八、蛋白质检验区43

九、其他区域43

第三节 质量控制体系43

一、抽样和制样43

二、DNA提取43

三、PCR扩增44

四、仪器校正与维护44

五、实验环境44

六、实验室清洁45

第三章　转基因食品检测的样品处理技术47

第一节 DNA的提取、纯化和定量47

一、DNA的提取47

（一）CTAB法47

（二）SDS法47

（三）改良SDS法48

（四）酚-三氯甲烷提取法48

二、DNA的纯化49

（一）溶媒萃取法49

（二）浓缩质体DNA49

（三）胶体核酸回收法50

三、DNA的定量50

（一）DNA定量50

（二）DNA纯度51

第二节 蛋白质的提取、纯化和定量51

一、蛋白质的提取51

（一）SDS凝胶加样缓冲液法51

（二）去污剂温和裂解法52

二、蛋白质的纯化53

三、蛋白质的定量55

（一）紫外分光光度法55

（二）福林-酚试剂法56

（三）考马斯亮蓝G-250染色法57

（四）银结合法57

第三节 其他生化成分的提取57

一、糖的提取57

（一）溶剂提取法58

（二）酸碱提取法58

（三）生物酶提取法59

（四）澄清剂59

二、脂肪的提取59

（一）索式提取法60

（二）巴布科克法61

（三）盖勃氏法62

第四章　转基因食品的定性PCR检测技术64

第一节 定性PCR检测方法概述64

一、PCR技术的基本原理64

（一）变性65

（二）退火65

（三）延伸65

二、PCR技术的特点66

（一）高特异性66

（二）高敏感性66

（三）简便快捷66

（四）PCR反应的局限性66

三、PCR技术的类型67

（一）锚定PCR67

（二）不对称PCR67

（三）反向PCR68

（四）多重PCR69

（五）逆转录PCR69

（六）巢式PCR70

（七）原位PCR71

（八）标记引物PCR72

（九）热不对称交错PCR72

（十）荧光定量PCR74

（十一）简并引物PCR74

（十二）加端PCR74

（十三）免疫PCR75

（十四）差异显示PCR75

（十五）差别PCR75

第二节 常规PCR检测技术75

一、基本操作流程75

（一）准备实验材料76

（二）准备试剂和设备76

（三）样品的DNA提取77

（四）PCR反应溶液的配制78

（五）常规PCR反应检测过程78

（六）结果分析78

二、操作关键问题78

（一）DNA模板的要求78

（二）防止污染79

（三）引物设计79

（四）反应条件优化79

三、结果判读80

四、质量控制81

（一）样品制备81

（二）设置对照81

第三节 实时荧光定性PCR检测技术81

一、基本操作流程81

（一）准备实验材料81

（二）准备试剂和设备82

（三）样品的DNA提取86

（四）PCR反应液的配制86

（五）实时PCR反应检测过程86

（六）数据分析87

二、操作的关键问题87

（一）设置对照87

（二）优化PCR体系87

（三）PCR操作过程88

三、结果判读88

（一）总体要求88

（二）应用TaqMan探针的实时荧光PCR结果分析88

（三）SYBR Green I染料实时荧光PCR的结果分析90

四、质量保证90

（一）操作环境90

（二）样品90

（三）对照的设置90

（四）试剂91

（五）仪器和设备91

第四节 检测方法实例92

一、普通PCR检测抗虫转基因大米Bt63成分92

（一）材料92

（二）操作步骤92

（三）结果分析93

二、巢式及半巢式PCR方法检测抗草甘膦转基因大豆油94

（一）材料94

（二）操作步骤94

（三）结果分析96

三、大米制品中转基因成分的实时荧光PCR检测97

（一）材料97

（二）操作步骤98

（三）检测结果99

四、市售饼干样品中转基因成分的实时荧光PCR检测方法102

（一）材料102

（二）方法102

（三）检测结果103

（四）结果判定104

第五章　定量PCR检测技术105

第一节 定量PCR检测技术概述105

一、原理和方法105

（一）传统定量PCR原理和方法105

（二）实时荧光定量PCR原理与方法107

二、实验数据处理113

（一）定量PCR实验数据处理原理113

（二）样品中转基因成分含量的计算方法114

三、不确定度分析115

（一）数学模型115

（二）不确定度来源115

（三）标准不确定度评定116

（四）扩展不确定度评定117

第二节 抗虫玉米MON810定量PCR检测实例117

一、结构特异性基因和品系特异性基因检测方法118

二、检测结果120

三、检测质量控制标准121

四、分析步骤的关键控制点及说明121

第三节 定量PCR的优势及存在的问题分析121

一、实时荧光定量PCR方法的优势121

二、实时荧光定量PCR方法的应用范围122

三、实时荧光定量PCR方法存在的问题122

四、定量PCR误差来源及消除方法122

第六章　蛋白质检测技术——免疫检测126

第一节 免疫检测技术概述126

一、蛋白质免疫检测技术原理126

二、免疫检测技术方法129

（一）ELISA129

（二）LFD130

（三）其他免疫检测技术方法132

三、免疫检测方法的发展133

第二节 免疫检测方法的步骤134

一、转基因免疫检测抗体的制备134

（一）抗原蛋白的提取和纯化134

（二）抗体制备135

二、转基因免疫检测ELISA方法的建立137

（一）棉叶中Bt杀虫蛋白的提取137

（二）间接ELISA法137

三、转基因免疫检测LFD方法138

（一）胶体金标记LFD试纸条的制备138

（二）检测步骤138

四、转基因磁珠免疫颗粒检测方法138

（一）免疫磁珠的制备138

（二）检测步骤139

五、转基因组织免疫检测方法139

第三节 免疫检测方法在转基因检测中的应用139

第四节 转基因免疫检测方法的误差141

一、转基因免疫检测方法的应用对象对检测结果的影响141

二、转基因免疫检测方法的误差来源142

三、质控方法147

第五节 转基因免疫检测方法实例148

一、磁免疫颗粒法定量检测转基因抗虫玉米MON810148

（一）微球的交联148

（二）二抗的生物素标记149

（三）蛋白质的提取149

（四）Luminex流式点阵仪分析149

（五）结果149

二、金标试纸条检测Cry1A（b）/Cry1A（c）蛋白150

（一）样品预处理151

（二）胶体金标记免疫试纸测试151

（三）结果判读151

（四）注意事项151

三、ELISA定量检测转基因抗虫玉米MON810151

（一）试剂的制备151

（二）样品提取152

（三）样品测定152

（四）注意事项152

第七章　其他检测转基因食品的技术153

第一节 基因芯片153

一、原理和方法153

（一）芯片的制备154

（二）芯片检测的质控措施154

（三）结果判断方法155

二、检测实例155

（一）多重PCR荧光标记-寡核苷酸芯片检测转基因食品155

（二）多重PCR-生物素标记-金银染色法-寡核苷酸芯片检测转基因161

第二节 等温扩增技术165

一、原理和方法165

二、LAMP应用实例167

第三节 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法169

一、原理和方法170

（一）原理170

（二）操作方法173

二、实例175

第八章　转基因产品管理相关政策法规177

第一节 中国转基因产品的标识管理177

一、主管部门177

二、相关法规177

三、适用范围177

四、转基因产品标识要求177

第二节 欧盟转基因产品的标识管理178

一、主管部门178

二、相关法规178

三、适用范围178

四、转基因产品标识要求178

第三节 韩国转基因产品的标识管理179

一、主管部门179

二、相关法规179

三、适用范围179

四、转基因产品标识要求180

第四节 日本转基因产品的标识管理181

一、主管部门181

二、相关法规181

三、适用范围181

四、转基因产品标识要求182

第五节 澳大利亚、新西兰转基因产品的标识管理183

一、主管部门183

二、相关法规183

三、适用范围183

四、转基因产品标识要求183

第六节 加拿大转基因产品的标识管理183

一、管理部门183

二、相关法规184

三、适用范围184

四、转基因产品标识要求184

附录　转基因检测标准185

一、中国国家标准185

二、中国出入境检验检疫行业标准185

三、中国农业行业标准185

四、中国烟草行业标准186

五、ISO国际标准186

参考文献188