实时荧光PCR技术 第2版PDF|Epub|txt|kindle电子书版本网盘下载

实时荧光PCR技术 第2版PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

第1章 临床PCR技术的发展历史及趋势1

第一节 PCR的起源和耐热DNA聚合酶的应用1

一、PCR的起源1

二、耐热DNA聚合酶的应用2

第二节 PCR的基本原理3

第三节 PCR的反应动力学5

第四节 PCR的扩增体系和扩增条件5

一、PCR扩增体系的基本要素5

二、PCR的标准扩增体系8

三、PCR扩增的增强剂9

四、降落PCR9

五、热启动PCR10

六、COLD-PCR10

七、PCR扩增结果分析11

第五节 PCR的特点12

一、高特异性12

二、高灵敏度12

三、简便快速12

四、特定的低纯度标本也可使用12

第六节 PCR的发展12

参考文献13

第2章 实时荧光PCR技术的基本原理和方法14

第一节 发展历程14

第二节 基本原理15

一、PCR扩增的理论模式15

二、实时荧光PCR的理论基础16

三、TaqMan实时荧光PCR的基本原理17

四、双链DNA交联荧光染料实时荧光PCR的基本原理19

五、双杂交探针实时荧光PCR的基本原理20

六、分子信标实时荧光PCR的基本原理20

七、蝎形探针实时荧光PCR的基本原理21

八、数字实时荧光PCR的基本原理24

第三节 引物、探针的特点及设计软件26

一、引物的特点26

二、探针的特点26

三、引物和探针设计软件27

第四节 多重实时荧光PCR28

参考文献28

第3章 临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立30

第一节 实验室的分区规划设计30

一、标本的接收30

二、实验室分区设计的一般原则及工作流程31

第二节 实验室质量管理体系的建立39

一、实验室质量管理概述39

二、实验室质量管理的特点41

三、质量体系文件的编写42

第三节 实验室的记录管理56

一、记录的种类56

二、记录的标识56

三、记录的填写57

四、记录的封面和目录59

五、记录的良好保存59

六、记录的保存期限59

七、过期记录的处理59

八、记录表格样式的持续改进59

九、电子记录的管理60

第四节 实验室验收与实验室认可60

一、实验室认可的由来及目的60

二、实验室认可与认证的区别61

三、实验室验收与实验室认可的关系61

参考文献62

第4章 临床PCR检验标本的采集、运送、保存及核酸提取63

第一节 标本采集、运送、保存63

一、标本采集63

二、标本运送65

三、标本保存65

第二节 常见临床标本的处理和保存66

一、血清（浆）样本66

二、全血样本66

三、外周血单个核细胞66

四、痰66

五、棉拭子67

六、脓液67

七、体液68

八、乳汁68

九、组织69

第三节 临床标本中PCR抑制物70

一、临床标本中PCR抑制物的来源及作用机制70

二、几种常见抑制物的作用机制及对策70

第四节 核酸的提取方法72

一、DNA提取的经典方法72

二、RNA的提取73

三、核酸提取的改良方法74

参考文献78

第5章 实时荧光PCR测定的数据处理83

第一节 基本概念83

第二节 实时荧光PCR外标绝对定量的数学模型85

一、基本计算公式的推导85

二、纵坐标为起始拷贝数对数值横坐标为Ct时的数学模型85

三、纵坐标为Ct横坐标为起始拷贝数时的数学模型86

第三节 实时荧光PCR相对定量的数学模型87

一、相对定量的标准曲线法87

二、2-△△Ct法89

三、2-△△Ct的改良方法89

四、多重PCR法91

第四节 用曲线拟合的方法进行数据处理92

一、Liu与Saint的方法92

二、Ramakers等的方法92

三、Tichopad等的方法92

参考文献93

第6章 实时荧光PCR仪及其发展94

第一节 PCR仪的发展历史及基本原理94

一、空气驱动循环PCR仪94

二、变温金属块PCR仪95

第二节 实时荧光PCR仪简介95

一、美国ABI公司生产的实时荧光PCR仪95

二、美国Cepheid公司的Smart Cycler实时荧光PCR仪98

三、美国Bio-Rad公司的实时荧光PCR仪99

四、美国Stratagene公司的实时荧光PCR仪100

五、Roche公司的LightCycler实时荧光PCR仪101

六、Corbert的RotorGene实时荧光PCR仪103

七、Eppendorf公司的Mastercycler ep realplex实时荧光PCR仪104

第三节 实时荧光PCR仪选择104

一、仪器使用的广泛程度104

二、工作量104

三、耗材的开放性105

四、硬件设计特点105

五、检测通道和可检测的荧光染料105

六、温度梯度功能105

七、软件功能105

第四节 数字PCR仪简介106

一、微流控芯片数字PCR107

二、液滴数字PCR107

第五节 实时荧光PCR仪的使用、维护和校准108

一、实时荧光PCR仪使用中的注意事项108

二、维护和校准108

参考文献111

第7章 临床PCR检验仪器设备的使用、维护和校准112

第一节 天平112

一、电子分析天平及其分类112

二、天平的正确使用113

三、天平的选择114

四、天平的维护和校准114

第二节 离心机115

一、离心机离心的基本原理115

二、离心力和相对离心力116

三、离心时间116

四、离心转子的选择119

五、离心管119

六、离心机的分类119

七、离心机的使用和维护120

第三节 微量加样器122

一、微量加样器的一般原理及分类122

二、加样器的选择及使用123

三、加样器的维护和校准129

参考文献133

第8章 临床PCR检验的质量保证134

第一节 概述134

一、基本概念134

二、质量保证、室内质量控制和室间质量评价之间的关系136

三、标本采集、运送、保存及其质量控制136

第二节 室内质量控制137

一、测定前质量控制137

二、核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制144

三、统计学质量控制146

第三节 室间质量评价160

一、室间质量评价的程序设计161

二、室间质量评价的局限性164

参考文献165

第9章 病毒核酸检测的标准物质及其应用167

第一节 概述167

一、基本概念167

二、病毒核酸检测用标准物质的种类和溯源关系169

第二节 病毒核酸检测用标准物质的制备170

一、原材料的选择和分装171

二、均匀性和稳定性172

三、定值174

四、标准物质的保存175

五、核酸检测用标准物质的意义175

六、核酸检测用标准物质的展望176

参考文献179

第10章 甲型肝炎病毒实时荧光PCR检测及临床意义182

一、HAV的特点182

二、HAV RNA实时荧光RT-PCR检测182

三、HAV RNA检测的临床意义185

参考文献186

第11章 乙型肝炎病毒实时荧光PCR检测及临床意义187

一、HBV的特点187

二、HBV DNA实时荧光PCR测定190

三、HBV变异的检测及其临床意义196

四、HBV cccDNA的检测及其临床意义200

五、HBV基因型的检测及其临床意义201

六、HBV RNA的检测及其临床意义204

七、HBV全基因组测定及其临床意义205

参考文献206

第12章 丙型肝炎病毒实时荧光RT-PCR检测及临床意义210

一、HCV的形态和基因组结构特点210

二、HCV的复制特点211

三、HCV的变异特点及基因型211

四、HCV RNA实时荧光RT-PCR测定212

五、HCV基因分型检测及其临床意义220

参考文献223

第13章 人免疫缺陷病毒-1实时荧光RT-PCR检测及临床意义226

一、HIV-1的特点226

二、HIV-1 RNA的实时荧光RT-PCR测定227

三、HIV-1 RNA测定的临床意义234

参考文献235

第14章 人乳头瘤病毒实时荧光PCR检测及临床意义237

一、HPV的形态和基因结构特点237

二、HPV的体内复制特点239

三、病毒的变异特点239

四、HPV基因型240

五、HPV DNA的实时荧光PCR测定240

六、HPV DNA检测的临床意义248

参考文献250

第15章 巨细胞病毒实时荧光PCR检测及临床意义253

一、人类巨细胞病毒的特点253

二、人类巨细胞病毒实时荧光PCR测定254

三、巨细胞病毒PCR检测的临床意义267

参考文献268

第16章 严重急性呼吸综合征冠状病毒实时荧光RT-PCR检测及临床意义269

一、SARS-CoV的特点269

二、SARS-CoV RNA实时荧光RT-PCR检测270

三、SARS-CoV PCR检测的临床意义286

参考文献286

第17章 EB病毒实时荧光PCR检测及临床意义288

一、EB病毒的特点288

二、EB病毒实时荧光PCR测定289

三、EB病毒PCR检测的临床意义294

参考文献295

第18章 流感病毒实时荧光RT-PCR检测及临床意义296

一、流感病毒的特点296

二、流感病毒的实时荧光RT-PCR测定298

三、流感病毒RT-PCR检测的临床意义320

参考文献320

第19章 风疹病毒实时荧光RT-PCR检测及临床意义321

一、风疹病毒的形态和基因组结构及功能特点321

二、风疹病毒的复制特点322

三、风疹病毒的变异特点及基因型323

四、风疹病毒实时荧光RT-PCR测定及其临床意义323

参考文献330

第20章 麻疹病毒实时荧光RT-PCR检测及临床意义332

一、麻疹病毒的形态和基因组结构及功能特点332

二、麻疹病毒的复制特点334

三、麻疹病毒的变异特点及基因型335

四、麻疹病毒实时荧光RT-PCR测定及其临床意义335

参考文献339

第21章 手足口病病原体实时荧光RT-PCR检测及临床意义341

一、手足口病病原体的形态和基因组结构特点341

二、手足口病病原体复制特点341

三、手足口病病原体实时荧光RT-PCR测定及其临床意义342

四、手足口病病原体检测及其临床意义349

参考文献349

第22章 埃博拉病毒实时荧光定量RT-PCR检测及临床意义351

一、EBOV的形态和基因组结构特点351

二、EBOV的基因分型352

三、EBOV RNA实时荧光RT-PCR测定及其临床意义352

参考文献360

第23章 中东呼吸综合征冠状病毒实时荧光RT-PCR检测及临床意义361

一、MERS-CoV的形态和基因组结构特点361

二、MERS-CoV的感染过程362

三、MERS-CoV RNA实时荧光RT-PCR测定及其临床意义363

参考文献379

第24章 沙眼衣原体实时荧光PCR检测及临床意义381

一、沙眼衣原体的形态和基因组结构特点381

二、沙眼衣原体的实时荧光PCR测定381

三、沙眼衣原体PCR检测的临床意义391

参考文献391

第25章 结核杆菌实时荧光PCR检测及临床意义394

一、结核杆菌的特点394

二、结核杆菌实时荧光PCR检测395

三、结核杆菌PCR检测的临床意义405

参考文献406

第26章 淋病奈瑟菌实时荧光PCR检测及临床意义407

一、淋病奈瑟菌的特点407

二、淋病奈瑟菌实时荧光PCR测定408

三、淋病奈瑟菌PCR检测的临床意义418

参考文献419

第27章 幽门螺杆菌实时荧光PCR检测及临床意义420

一、幽门螺杆菌的特点420

二、幽门螺杆菌实时荧光PCR测定421

三、幽门螺杆菌PCR检测的临床意义430

参考文献430

第28章 肺炎支原体实时荧光PCR检测及临床意义432

一、肺炎支原体的结构特点432

二、肺炎支原体的实时荧光PCR检测432

三、肺炎支原体PCR检测的临床意义437

参考文献437

第29章 刚地弓形虫实时荧光PCR检测及临床意义438

一、刚地弓形虫的特点438

二、刚地弓形虫的实时荧光PCR检测439

三、刚地弓形虫PCR检测的临床意义444

参考文献444

第30章 解脲支原体实时荧光PCR检测及临床意义446

一、解脲支原体的特点446

二、解脲支原体实时荧光PCR检测446

三、解脲支原体PCR检测的临床意义451

参考文献452

第31章 EGFR基因实时荧光PCR检测及临床意义453

一、EGFR基因特点及常见突变类型453

二、相关靶向治疗药物454

三、EGFR基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义455

参考文献463

第32章 KRAS基因实时荧光PCR检测及临床意义466

一、KRAS基因特点及常见突变类型466

二、KRAS基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义466

参考文献477

第33章 BRAF基因突变的实时荧光PCR检测及临床意义479

一、BRAF的基因组结构特点479

二、BRAF基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义480

参考文献484

第34章 PIK3CA基因突变实时荧光PCR检测及临床意义486

一、PIK3CA的基因结构特点486

二、PIK3CA基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义487

参考文献497