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1绪论1

1.1植物基因启动子的研究进展1

1.1.1启动子的结构和功能1

1.1.2启动子的分类1

1.2植物转录因子的研究2

1.2.1转录因子的结构和分类2

1.2.2转录因子的活性4

1.2.3转录因子的功能4

1.2.4 MYB转录因子的研究进展6

1.3本研究的目的和意义8

2白桦BplMYB46基因的表达研究10

2.1实验材料10

2.1.1植物材料10

2.1.2载体与菌株10

2.1.3主要试剂10

2.1.4药品及培养基制备11

2.2实验方法12

2.2.1 BplMYB46转录因子的亚细胞定位12

2.2.2白桦BplMYB46基因分析16

2.2.3白桦BplMYB46基因的表达16

2.2.4 BplMYB46启动子序列分析18

2.2.5 BplMYB46启动子的时空表达分析18

2.3结果与分析22

2.3.1 BplMYB46转录因子的亚细胞定位22

2.3.2白桦BplMYB46基因分析24

2.3.3白桦BplMYB46基因的表达24

2.3.4 pCAMBIA1301-BplMYB46启动子序列元件分析27

2.3.5 BplMYB46启动子的时空表达28

2.4讨论30

2.5本章小结31

3白桦BplMYB46基因的功能研究33

3.1实验材料33

3.1.1植物材料33

3.1.2载体与菌株33

3.1.3试剂33

3.1.4溶液及培养基制备34

3.2实验方法35

3.2.1 BplMYB46基因植物过表达载体的构建和工程菌的制备35

3.2.2 BplMYB46基因对白桦的遗传转化40

3.2.3 BplMYB46转基因白桦在非生物胁迫下的抗逆分析42

3.2.4 BplMYB46基因在白桦次生壁合成中的功能分析46

3.3结果与分析48

3.3.1 BplMYB46基因植物表达载体的构建和工程菌的制备48

3.3.2转基因白桦的筛选与检测52

3.3.3 BplMYB46转基因白桦苗非生物胁迫下的抗逆分析54

3.3.4 BplMYB46基因在白桦次生壁合成中的功能分析65

3.4讨论69

3.5本章小结71

4 BplMYB46转录激活结构域和同源蛋白的互作研究73

4.1实验材料73

4.1.1菌株与载体73

4.1.2常用试剂73

4.1.3药品及培养基制备73

4.2实验方法75

4.2.1 BplMYB46转录因子转录激活结构域的研究75

4.2.2 BplMYB46转录因子与同源基因互作的研究78

4.3结果与分析81

4.3.1 BplMYB46转录因子转录激活结构域分析81

4.3.2 BplMYB46转录因子与同源蛋白的互作83

4.4讨论86

4.5本章小结87

5 BplMYB46识别顺式作用元件的研究89

5.1实验材料89

5.1.1菌株与载体89

5.1.2主要试剂89

5.1.3药品及培养基制备90

5.2实验方法91

5.2.1 BplMYB46识别顺式作用元件的研究91

5.2.2 BplMYB46与顺式作用元件的互作验证100

5.2.3染色质免疫共沉淀（ChIP）技术分析BplMYB46与下游基因的互作106

5.3结果与分析109

5.3.1 BplMYB46识别顺式作用元件的分析109

5.3.2 BplMYB46与顺式作用元件互作分析114

5.3.3 ChIP实验结果分析117

5.4讨论118

5.5本章小结120

6 BplMYB46调控下游基因的表达分析121

6.1实验材料121

6.1.1植物材料121

6.1.2常用试剂121

6.1.3溶液配制121

6.2实验方法121

6.2.1 RNA的提取与反转录121

6.2.2数字基因表达谱文库的构建和测序122

6.2.3数据的处理122

6.2.4测序评估122

6.2.5基因表达量统计123

6.2.6差异表达基因筛选123

6.2.7 RT-PCR方法验证表达谱测序结果123

6.3结果与分析125

6.3.1表达谱测序结果评估125

6.3.2差异表达基因分析129

6.3.3 RT-PCR验证表达谱结果131

6.4讨论132

6.5本章小结133

7讨论与展望134

7.1讨论134

7.2展望136

参考文献137