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第一章 绪论1

第一节 概论1

一、标准物质概念更为包容1

二、新类型标准物质不断出现1

三、标准物质评定技术不断发展并面临新挑战2

四、规范化研制标准物质形成趋势2

五、高等级标准物质的发展受到重视2

六、标准物质国际合作日益广泛3

第二节 分子水平标准物质研制历史和现状3

一、分子水平标准物质的研制历史3

二、分子水平生物标准物质的研制现状7

第三节 分子水平标准物质的种类及其应用8

一、生物成分量标准物质8

二、生物活性量标准物质9

三、生物结构量标准物质9

第四节 研制动物检疫分子水平标准物质的重要性和必要性9

一、我国动物检疫诊断试剂现状10

二、我国动物传染病体外诊断试剂质量评价标准物质的研制及审批管理10

三、动物检疫分子水平标准物质的研制意义11

第二章 生物计量学在动物检疫分子水平标准物质研制中的应用13

第一节 生物计量学概述13

一、生物计量概述与起源13

二、生物计量特点14

三、生物计量的任务15

第二节 生物计量基标准15

一、基本定义15

二、标准物质的分类与分级16

三、标准物质的特点18

四、标准物质的基本要求18

五、标准物质的溯源性19

第三节 分子水平生物标准物质的研制19

一、候选物质的选择19

二、生物标准物质的制备19

三、均匀性检验20

四、稳定性考察21

五、生物标准物质的定值23

第四节 生物标准物质的研制实例25

一、血细胞计数国家标准物质的研制25

二、核苷酸纯度标准物质研制30

参考文献36

第三章 动物检疫DNA标准样品的研制37

第一节 概论37

第二节 动物检疫基因组DNA标准样品的研制方案简介37

一、国内外研究现状37

二、制备基因组DNA标准样品的操作步骤38

三、均匀性检验39

四、稳定性检验40

五、定值42

六、计量溯源性43

第三节 霍乱弧菌hlyA基因、rfb-O1基因、rfb-O139基因和ctxAB基因标准质粒库的研制实例44

一、概述44

二、材料与方法44

三、试验结果47

四、实验室间定性验证56

五、讨论57

第四节 霍乱弧菌hlyA基因、rfb-O1基因、rfb-O139基因和ctxAB基因标准样品的制备实例58

一、样品制备58

二、均匀性检验58

三、稳定性检验62

第五节 沙门氏菌invA基因质粒标准样品的研制实例65

一、材料65

二、试验方法66

三、结果与讨论68

第六节 白斑综合症病毒核酸标准物质的制备实例72

一、材料与仪器73

二、试验方法74

三、试验结果77

四、讨论80

参考文献80

第四章 动物检疫RNA核酸基因片段标准样品的研制83

第一节 概论83

第二节 病毒全RNA标准样品的研制方案简介83

一、病毒的分离与纯化83

二、病毒的增殖86

三、病毒的特性86

四、一级结构的获得87

五、均匀性88

六、稳定性检验89

七、标准样品的定值90

八、标准样品的包装与贮存90

第三节 RNA功能基因片段标准样品的研制方案简介91

一、病毒RNA功能基因片段质粒的获取91

二、体外转录92

三、稳定性基质的研究92

四、均匀性92

五、稳定性92

六、定值92

第四节 H5亚型禽流感病毒HA基因片段标准样品的研制实例92

一、H5亚型禽流感病毒命名92

二、选择目标片段及克隆载体92

三、H5亚型禽流感病毒目标分子片段的扩增、克隆与测序93

四、体外转录96

五、定性检定96

六、均匀性和稳定性检验97

七、定值方法97

第五节 H9N2亚型禽流感病毒全RNA标准样品研制实例97

一、病毒初步鉴定97

二、病毒的增殖与纯化98

三、本研究病毒株的命名98

四、病毒株各基因引物对的设计98

五、病毒株的荧光RT-PCR鉴定98

六、全基因的RT-PCR扩增、测序及分析99

七、均匀性104

八、稳定性104

九、定值104

第六节 A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析105

一、材料105

二、试验方法105

三、试验结果107

四、讨论111

第七节 新城疫病毒中强毒株核酸检测用标准样品的研制及不确定度分析112

一、材料112

二、试验方法113

三、试验结果115

四、讨论119

第八节 口蹄疫病毒核酸检测标准样品的研制120

一、材料120

二、试验方法121

三、试验结果122

四、讨论126

参考文献127

第五章 动物检疫假病毒标准物质的研制131

第一节 概论131

一、裸露核酸131

二、病毒颗粒132

三、内含特定核酸片段的病毒样颗粒132

第二节 RNA功能基因片段假病毒标准样品的研制方案简介134

一、病毒RNA功能基因片段质粒的获取134

二、病毒RNA功能基因片段质粒的增殖134

三、真核表达载体及假病毒载体的选择134

四、稳定性基质的研究134

五、均匀性135

六、稳定性135

七、定值135

第三节 含马动脉炎病毒N基因序列的病毒样颗粒的制备135

一、材料135

二、试验方法136

三、试验结果143

四、讨论147

第四节 含非洲马瘟病毒核酸序列的病毒样颗粒的研制报告148

一、材料148

二、试验方法148

三、试验结果152

四、结论和讨论153

第五节 鲤春病毒假病毒标准物质的制备154

一、材料155

二、试验方法155

三、试验结果159

四、讨论162

第六节 H9亚型流感病毒HA基因假病毒标准样品实例162

一、引物设计162

二、病毒基因组RNA的提取162

三、HA基因的RT-PCR扩增162

四、HA基因的克隆163

五、感受态细胞的制备（氯化钙法）163

六、连接产物及质粒的转化164

七、质粒的提取164

八、序列测定164

九、转移载体的构建164

十、假病毒的包装164

十一、均匀性164

十二、稳定性165

十三、定值方法165

参考文献165

第六章 动物检疫蛋白质标准样品的研制168

第一节 概论168

第二节 蛋白质含量标准物质的研制168

一、蛋白质计量的重要性和迫切性169

二、国际蛋白质含量标准物质研制现状及趋势169

三、我国在蛋白质计量方面存在的主要问题170

四、我国蛋白质含量标准物质研制情况170

第三节 动物检疫蛋白质标准样品的研制及实例171

一、蛋白质标准样品中的冻干保护剂171

二、蛋白质标准样品的冻干保护机制173

三、蛋白质冻干保护剂的选择174

四、动物检疫蛋白质标准样品研制实例——牛布鲁氏菌病阳性血清标准样品175

参考文献175

第七章 动物检疫分子水平标准样品质量控制179

第一节 概述179

第二节 动物检疫分子水平标准样品研制过程中的质量控制180

一、动物检疫分子水平标准样品研制过程质量控制180

二、动物检疫分子水平标准样品生产复制过程质量控制189

三、动物检疫分子水平标准样品的保存191

四、动物检疫分子水平标准样品分发及运输192

五、动物检疫分子水平标准样品技术咨询服务193

第三节 动物检疫分子水平标准样品使用过程中的质量控制193

一、标准样品证书193

二、标准样品开封后保存194

第四节 动物检疫分子水平标准样品的外部质量评价194

一、标准样品质量管理体系的外部评审194

二、针对标准样品检测方法的外部质量控制195

三、针对标准样品研制项目的外部评审195

四、标准样品评价195

参考文献197

第八章 动物检疫分子水平有证标准样品的认定和管理198

第一节 我国标准物质的认定及管理模式198

一、标准物质管理规章198

二、标准物质的分类和分级199

三、标准物质的定级评审200

第二节 标准样品的认定流程201

一、标准物质申报的技术文件和样品的要求201

二、标准物质制造计量器具许可证申请书的填写202

三、标准物质研制报告的编写要求202

四、标准物质定级评审的依据202

五、标准物质定级评审程序203

六、标准物质证书编写要求204