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第一章 总论1

第一节 流式细胞术与流式细胞仪概述1

一、流式细胞术概述1

二、流式细胞仪2

（一）基本结构2

（二）工作原理3

（三）分析型流式细胞仪介绍6

（四）分选型流式细胞仪介绍9

第二节 荧光染料的选择与常用的染色技术12

一、荧光染料的特性及其应用12

二、常用的染色技术16

（一）细胞免疫荧光染色技术16

（二）核酸荧光染色技术16

（三）荧光微球捕获染色技术17

第三节 结果分析与流式图18

一、流式通道18

二、流式直方图18

三、流式散点图19

四、流式等高线图20

第四节 流式细胞术的基本操作与技巧20

一、标本的采集、运送与储存20

二、标本的处理21

（一）独立细胞样品制备22

（二）免疫器官样品制备23

（三）实体脏器样品制备24

三、荧光素偶联抗体及其标记方法24

（一）荧光素与荧光素偶联抗体24

（二）样品封闭26

（三）荧光素偶联抗体标记27

四、光电倍增管电压设定28

五、对照的设置28

（一）阴性对照的设置28

（二）FMO对照29

（三）阳性对照的设置29

六、补偿调节30

（一）补偿调节的原理30

（二）调节补偿的具体方法30

（三）三色和四色分析补偿调节方法31

（四）影响补偿大小的因素32

七、阈值设定33

（一）减少样品中死细胞比例的方法34

（二）流式分析时区分死细胞和活细胞的方法34

八、流式分选模式选择35

（一）纯度模式35

（二）得率模式（富集模式）36

（三）单细胞模式36

九、上样速度控制36

（一）流式分析速度控制36

（二）流式分选速度控制36

十、分选设门基本原则36

十一、流式分选基本步骤37

第五节 方法学特点38

一、单细胞分析38

二、定量分析38

三、快速性39

四、准确性39

五、特异性39

六、可重复性39

七、多参数分析39

第六节 常见影响因素40

一、温度40

二、pH40

三、荧光染料浓度40

四、杂质41

五、细胞固定剂41

六、溶液黏度41

七、其他因素41

第七节 质量控制41

一、室内质量控制42

（一）分析前对样本和试剂的质量控制42

（二）分析中仪器及检测过程的质量控制43

（三）分析后数据传输的质量控制47

二、室间质量评价47

（一）国家卫计委流式检验室间质评48

（二）国际流式检验室间质评48

第八节 新进展48

一、不设门流式方法的应用48

二、介绍几个较有用的组合49

第二章 流式分析术及流式分选术的应用51

第一节 流式分析术的应用51

一、细胞群比例测定51

二、机体免疫功能监测及细胞表型鉴定55

（一）T淋巴细胞及其亚群的检测57

（二）B淋巴细胞及其亚群的检测85

（三）NK细胞的检测及功能分析87

（四）树突状细胞的检测及功能分析90

（五）单核细胞的检测及亚群分析100

（六）中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞检测103

三、检测细胞因子106

（一）胞内染色法检测细胞因子107

（二）胞内染色法与ELISA法比较111

（三）CBA法测定细胞因子113

（四）CBA法与ELISA法比较116

四、检测细胞增殖116

（一）相对计数法117

（二）CFSE标记法118

（三）BrdU标记法126

（四）抗Ki67抗体标记法129

五、检测细胞凋亡133

（一）Annexin V/PI双染色法133

（二）SYTO/PI双染色法135

（三）细胞DNA含量分析法139

（四）线粒体损伤检测法140

（五）活化的Caspase-3检测法141

（六）荧光素偶联的Caspase抑制剂标记法141

（七）甲酰胺诱导ssDNA单抗检测法143

（八）TUNEL法143

六、检测细胞周期145

（一）非特异性核酸荧光染料标记法145

（二）特异性细胞周期调节蛋白检测法146

七、检测细胞杀伤能力147

（一）荧光测定法与流式细胞术149

（二）报告基因转染法162

八、检测细胞吞噬功能162

九、检测胞内活化的激酶164

十、检测基因表达166

（一）染色体分选166

（二）数量DNA纤维作图167

（三）端粒长度检测169

（四）GFP报告基因系统170

（五）lacZ报告基因系统172

（六）B－内酰胺酶报告基因系统173

十一、检测钙相关分子173

（一）检测细胞内游离的钙离子水平173

（二）检测钙蛋白酶活性174

（三）检测细胞膜钙泵活性175

十二、表观遗传学中的应用177

（一）CHIP-ON-BEADS180

（二）检测细胞水平组蛋白修饰情况181

十三、检测缝隙连接介导的细胞通讯182

十四、检测细胞内pH和钠氢转运体活性183

（一）检测细胞内pH183

（二）检测钠氢转运体活性183

十五、细胞间及细胞与环境间相互作用184

（一）细胞迁移分析184

（二）细胞接触及黏附分析187

十六、其他应用188

（一）检测活性氧簇188

（二）检测细胞内游离的锌离子水平188

（三）荧光共振能量转移结合流式细胞术检测两种蛋白质的直接结合189

（四）检测端粒长度191

（五）检测脂筏结合蛋白192

第二节 流式分选术的应用194

一、流式分选与磁性分选194

二、流式分选独立群体细胞198

三、流式分选非独立细胞群体198

四、流式分选低比例细胞群体199

（一）强势细胞群的辐射影响199

（二）流式分选结合磁性分选199

（三）二次分选法200

五、流式分选干细胞201

（一）流式分选造血干细胞201

（二）流式分选间充质干细胞203

（三）流式分选肿瘤干细胞205

第三章 流式细胞术的临床应用209

第一节 感染性疾病209

一、微生物检验209

（一）荧光素偶联抗体检测法209

（二）抗体结合人工荧光微球检测法213

（三）微生物活性流式检测215

（四）人工微球荧光免疫试验检测抗体217

（五）荧光原位杂交流式检测法217

（六）PCR免疫微球法218

（七）原位PCR杂交流式检测法219

二、AIDS患者的免疫功能检测219

（一）AIDS发病与免疫系统220

（二）AIDS患者的免疫功能检测223

第二节 血液系统疾病226

一、机体造血功能监测226

（一）造血干细胞和造血祖细胞的分类检测227

（二）网织红细胞测定229

（三）网织血小板测定231

二、机体凝血功能监测232

（一）血小板的形态、结构与功能232

（二）血小板流式检验现状234

（三）血小板精确计数235

（四）活化血小板测定237

（五）血小板膜糖蛋白检测239

（六）血小板微粒测定241

三、白血病免疫诊断与分型242

（一）正常骨髓造血细胞分化成熟的抗原表达规律242

（二）白血病免疫诊断与分型的基本原理与意义243

（三）临床常见白血病类型的免疫诊断与分型要点248

（四）临床少见白血病类型的免疫诊断与分型要点270

第三节 自身免疫性疾病的鉴别诊断275

一、自身抗体的检测275

（一）红细胞表面相关免疫球蛋白的测定276

（二）粒细胞表面相关免疫球蛋白的测定280

（三）血小板表面相关免疫球蛋白的测定285

二、强直性脊柱炎的鉴别诊断291

（一）HLA-B27/HLA-B7表达的测定291

（二）HLA-B27/CD3表达的测定292

三、阵发性睡眠性血红蛋白尿与PNH克隆检测295

（一）红细胞表面CD55和CD59分子表达检测297

（二）白细胞表面CD55和CD59分子表达检测298

（三）白细胞的FLAER法测定299

第四节 肿瘤临床中的应用302

一、细胞周期与DNA倍体检测302

（一）细胞周期检测302

（二）DNA倍体检测304

二、细胞凋亡检测305

（一）PI染色法305

（二）Annexin V/PI染色法306

（三）末端转移酶标记（TUNEL）法306

三、肿瘤化疗多药耐药性监测307

第五节 移植中的应用309

一、干细胞移植310

（一）外周血干细胞移植311

（二）脐血干细胞移植311

（三）流式细胞技术在造血干细胞移植中的应用312

二、骨髓移植320

三、器官移植321

（一）流式细胞术交叉配型322

（二）同种异体抗体检测323

（三）移植术后免疫监测325

第六节 超敏反应中的应用326

一、IgE的检测326

（一）速发型超敏反应326

（二）速发型超敏反应的机制327

（三）速发型超敏反应的检测327

（四）嗜碱性粒细胞流式细胞术检测328

（五）流式细胞术体外检测和识别药物过敏反应328

二、促炎因子的检测328

附录330

附录一 临床常见流式检验指标的正常参考范围330

附录二 临床流式细胞学检验技术相关名词334

附录三 常用流式检验试剂的配制335

附录四 流式细胞仪工作术语337