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第一篇　常用实验技术1

第一章　分光光度技术1

一、光的基本知识1

二、朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律2

三、分光光度计结构简介3

四、分光光度技术的应用4

五、分光光度法的误差5

六、使用分光光度计的注意事项6

第二章　色谱技术7

第一节　概述7

一、色谱法的概念和特点7

二、色谱法的分类8

一、吸附色谱9

第二节　常用的色谱方法9

二、分配色谱12

三、凝胶色谱14

四、离子交换色谱19

五、亲和色谱21

六、高效液相色谱23

第三章　电泳技术27

第一节　基本原理27

一、电荷的来源27

二、迁移率28

三、影响电泳速度的因素29

第二节　醋酸纤维薄膜电泳30

第三节　琼脂糖凝胶电泳31

一、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系31

三、琼脂糖凝胶电泳基本方法简介32

二、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系32

一、聚丙烯酰胺凝胶聚合原理及相关特性33

第四节　聚丙烯酰胺凝胶电泳33

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理34

三、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳原理37

四、聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳原理38

五、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理39

六、聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理40

第五节　毛细管电泳41

一、基本原理41

二、毛细管电泳仪41

四、进样42

五、电泳和检测42

三、电渗42

六、毛细管电泳分离模式43

七、毛细管电泳的特点43

第六节　染色方法44

一、蛋白质染色44

二、脂蛋白染色45

三、核酸的染色45

第四章　离心技术47

第一节　离心理论47

一、离心分离的原理47

二、沉降系数49

三、相对离心力和离心时间49

四、离心机的分类50

一、差速离心法51

第二节　离心分离的种类51

二、密度梯度离心法52

第三节　离心操作要领53

第五章　透析和超滤55

一、透析55

二、超滤56

第六章　实验方法及质量控制57

一、准确度57

二、特异性58

三、精密度58

四、灵敏度59

五、质量控制图60

一、PCR原理和特点62

第七章　PCR技术62

二、PCR系统的组成及PCR最适条件63

第八章　基因工程技术65

第一节　概述65

一、基因和基因工程的概念65

二、基因工程的兴起和发展65

三、基因工程的基本技术程序66

第二节 目的基因的制备66

一、限制性内切酶酶切获取66

二、化学法合成67

三、反转录合成cDNA67

四、组建“基因组文库”，钓取目的基因67

五、采用PCR方法制备目的基因67

二、表达载体68

一、克隆载体68

第三节　基因载体的选择68

三、常用的克隆载体70

第四节　基因工程常用的工具酶71

一、限制性核酸内切酶71

二、DNA聚合酶74

三、T4 DNA连接酶74

四、末端脱氧核苷酸转移酶74

八、碱性磷酸酶75

第五节　重组体的构建75

一、连接方式75

七、脱氧核糖核酸酶Ⅰ75

六、Sl核酸酶75

五、逆转录酶75

二、重组效率的影响因素76

第六节　重组体导入受体细胞76

一、重组体导入原核细胞76

二、重组体导入真核细胞77

第七节　基因导入受体细胞后的筛选和鉴定79

一、筛选79

二、鉴定80

第二篇　实验项目81

第九章　基本实验81

实验一　蛋白质的定量测定81

一、Folin－酚试剂法82

二、考马斯亮蓝G-250染色法84

三、紫外分光光度法85

四、双缩脲法87

实验二　氨基酸的离子交换柱色谱分离88

实验三　血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离90

实验四　醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白92

实验五　蛋白质的透析纯化94

实验六　血清过氧化氢酶Km值的测定95

实验七　血糖测定98

一、改良的邻甲苯胺硼酸法98

二、葡萄糖氧化酶法99

三、吴宪－Folin法101

实验八　胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响102

实验九　血清甘油三酯（TG）的测定103

一、酶法测定甘油三酯103

二、乙酰丙酮法测定甘油三酯105

实验十　血浆高密度脂蛋白－胆固醇和总胆固醇的测定107

实验十一　酮体的生成和利用109

一、酮体的生成和利用定性测定109

二、酮体的生成与利用定量测定110

实验十二　血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的测定112

实验十三　免疫血清的制备115

实验十四　吞噬细胞的功能测定117

一、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）117

二、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）118

实验十五　细胞免疫功能测定118

一、外周血单个核细胞的分离118

二、E玫瑰花环试验120

三、淋巴细胞转化试验121

四、NK细胞活性的检测124

实验十六　凝集反应127

一、直接凝集反应127

二、间接凝集反应130

实验十七　沉淀反应132

一、琼脂扩散试验132

二、对流免疫电泳135

三、免疫电泳136

四、火箭免疫电泳138

实验十八　免疫荧光技术139

实验十九　免疫酶技术141

一、夹心法检测HBsAg141

二、夹心法检测HBeAg144

三、夹心法检测抗－HBsAg145

四、竞争法检测抗－HBc146

五、竞争法检测抗－HBe147

实验二十　放射免疫测定技术149

实验二十一　细胞因子的检测150

一、IL-1的检测（生物活性测定）151

二、夹心法检测TNF152

第十章　提高型实验155

实验二十二　不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白155

实验二十三　琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制158

实验二十四　真核基因组DNA的分离纯化159

一、组织细胞DNA提取（酚抽提法）160

二、外周血白细胞DNA提取（NaI法）162

实验二十五　核酸凝胶电泳163

一、DNA的琼脂糖凝胶电泳165

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳167

实验二十六　DNA浓度的测定（紫外分光光度计法）170

实验二十七　DNA为模板的PCR扩增171

实验二十八　质粒DNA的提取（碱变性裂解法）173

实验二十九　限制性核酸内切酶的酶切和鉴定174

实验三十　载体与目的基因的连接177

实验三十一　重组质粒转化大肠杆菌及初步筛选180

实验三十二　免疫系统组分的分离及活性检测181

一、小鼠胸腺、脾摘除术181

二、小鼠淋巴细胞分离及活性检测182

第十一章　研究创新型实验183

实验三十三　肝糖原的提取和鉴定183

实验三十四　不同组织ALT活性测定及温度、pH的影响184

一、初用玻璃仪器的清洗185

二、使用过的玻璃仪器的清洗185

第三篇　专题篇185

第一节　常用玻璃器皿的洗涤185

第十二章　实验室基本操作185

三、各种洗涤液的配方及使用186

第二节　常用量器的校正187

第三节　常用量器的正确使用189

一、容量瓶189

二、量筒189

三、有分度吸量管189

四、奥氏吸管189

二、注意事项190

三、加样器的校正190

一、操作方法190

第四节　加样器的使用和校正190

第五节　试剂的选用和保管191

一、化学试剂191

二、试剂配制与使用原则192

第六节　常用实验样品的制备194

一、血液样品195

二、尿液样品195

三、组织样品196

第七节　分光光度计的使用196

一、721型分光光度计196

二、722S分光光度计的使用198

第十三章　实验室常用数据201

第一节　基因工程抗体技术206

第十四章　免疫学新技术206

一、人－鼠嵌合抗体207

二、单链抗体的构建208

第二节　流式细胞术208

一、基本原理208

二、意义209

三、仪器的操作和使用210

第三节 酶联免疫斑点试验211

第十五章　实验须知和实验报告的书写要求214

第一节　实验须知214

一、实验目的214

二、实验要求214

三、试剂使用214

四、实验室规则214

第二节　实验报告的书写要求214