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第一部分 生物化学实验基本知识3

第一章 生物化学实验的安全与要求3

第一节 生物化学实验室规则3

第二节 生物化学实验室安全与防护常识4

一、实验室安全要求4

二、实验室可能出现的危险情况5

第二章 实验记录与实验报告8

第一节 实验记录8

第二节 实验报告8

一、实验报告的格式9

二、实验报告的内容9

三、实验结果的讨论9

第三章 生物化学实验基本实验操作10

第一节 玻璃仪器的洗涤与干燥10

一、玻璃仪器的清洗10

二、一些常用的洗涤剂11

三、玻璃仪器的干燥11

四、溶液的混匀12

五、过滤12

第二节 计量仪器的选择与使用13

一、液体的量取13

二、液体的盛放和储存17

第三节 灭菌及消毒方法18

一、物理方法灭菌18

二、化学方法灭菌19

三、过滤除菌19

四、紫外杀菌19

第四章 生物化学实验室的基本设施与装备20

第一节 基本设施20

一、温度与环境设施20

二、生物培养设施20

三、暗室20

第二节 主要装备21

一、消毒设备21

二、实验室纯水设备21

三、计量仪器与设备21

四、电泳装置21

五、离心设备21

六、层析设备22

七、PCR仪22

八、其他设备22

第五章 生物大分子制备技术23

第一节 生物大分子制备的前处理23

一、材料的选择23

二、细胞的破碎23

第二节 生物大分子的分离纯化24

一、生物大分子的提取24

二、生物大分子分离纯化的方法25

第二部分 生物化学实验原理与技术29

第六章 分光光度技术29

一、基本原理29

二、分光光度计的分类和构造30

第七章 电泳技术32

一、基本原理32

二、几种常用电泳35

第八章 层析技术40

一、层析的分类40

二、层析中的常用术语41

三、纸层析44

四、薄层层析45

五、离子交换层析46

六、凝胶层析48

七、亲和层析50

第九章 离心技术51

一、基本原理51

二、离心机和转子的种类51

三、制备型超速离心的分离方法54

四、离心操作的注意事项56

第十章 透析技术57

一、透析原理及影响因素57

二、透析技术的应用58

三、透析操作及注意事项58

第三部分 生物化学基础实验63

第十一章 糖与脂类63

实验一 糖定量测定（蒽酮法）63

实验二 脂肪皂化值的测定65

实验三 脂肪碘值的测定67

第十二章 蛋白质69

实验四 氨基酸的分离与鉴定69

实验五DNS-C1法测定蛋白质N-末端的氨基酸72

实验六 蛋白质的沉淀作用74

实验七 蛋白质的两性反应与等电点的测定77

实验八 氨基酸和蛋白质的颜色反应79

实验九 牛乳中蛋白质的提取与鉴定82

实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质83

实验十一 蛋白质总氮量的测定——凯氏定氮法87

实验十二 凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量90

实验十三 细胞色素c的制备及其测定92

实验十四 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质95

实验十五 血红蛋白的凝胶过滤98

实验十六SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定蛋白质相对分子质量99

实验十七DEAE-离子交换剂纯化血清IgG108

第十三章酶111

实验十八 酶的性质研究111

实验十九 细胞色素氧化酶的作用116

实验二十胰蛋白酶抑制剂的制备与抑制活性的测定117

实验二十一 亲和层析法从鸡蛋清中分离溶菌酶120

实验二十二 聚丙烯酰胺凝胶分离过氧化物同工酶123

实验二十三 水果或蔬菜中抗坏血酸的测定（2，6-二氯酚靛酚法）127

实验二十四 超氧化物歧化酶（SOD）活力测定129

实验二十五 酯酶和乳酸脱氢同工酶分析133

实验二十六 胡萝卜素的柱层析分离136

第十四章糖、脂肪、蛋白质代谢139

实验二十七 胰岛素对血糖水平的影响139

实验二十八 肝糖原的提取与鉴定141

实验二十九 脂肪酸β-氧化作用143

实验三十 植物体内的转氨基作用145

实验三十一 纸层析分析动物组织的转氨基作用146

实验三十二 转氨酶活性的测定148

第十五章 核酸151

实验三十三 肝脏DNA的提取151

实验三十四 动物肝脏RNA的制备154

实验三十五 碱性SDS法提取大肠杆菌质粒156

实验三十六 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定159

实验三十七 浓盐法提取酵母RNA161

实验三十八 紫外吸收法测定核酸含量163

实验三十九 二苯胺显色法测定DNA含量164

实验四十 定磷法测定RNA含量166

实验四十一 植物DNA的提取与测定168

实验四十二 植物总RNA的提取与分析171

实验四十三PCR扩增技术173

实验四十四DNA琼脂糖凝胶电泳176

实验四十五总RNA的提取及RT - PCR扩增目的基因178

第四部分 综合性实验185

第十六章古DNA研究简介185

第十七章古DNA的提取与PCR扩增188

实验四十六古DNA的提取188

实验四十七古DNA多重PCR扩增190

实验四十八PCR产物的电泳及纯化193

第十八章古DNA片段的分子克隆195

实验四十九 大肠杆菌感受态细胞的制备195

实验五十 重组DNA分子连接及转化197

实验五十一 转化菌落PCR检测200

附录204

一、常用酸碱和固态化合物的部分数据204

二、溶液的配制205

三、标准缓冲溶液的配制方法205

四、常用缓冲液的配制206

五、常用试剂和电泳缓冲液的配制209

六、电泳染色方法210

七、硫酸铵饱和度的常用表213

八、常用核酸与蛋白质的换算数据214

九、常用层析介质数据215

十、离心力与离心机转速测算表217

十一、与DNA凝胶电泳有关的数据218

十二、常用培养基的配制219

十三、常用蛋白质相对分子质量标准参照物220

十四、十进位数量词头及符号220

参考文献221