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A 大分子的转移5

第1篇 蛋白质5

1.大分子物质冲击式进入贴附细胞5

2.用肽载体将生物活性蛋白导入哺乳动物细胞应用于抗体和治疗性蛋白的转送13

3.用链球菌溶血素A（Streptolysin O）研究细胞表面膜的选择性透化作用19

第2篇 基因25

4.用于基因转移的新的阳离子脂质体25

5.基因转送的阳离子多聚体：聚阳离子DNA复合物的形成及体外转染29

6.活体胚胎的电穿孔术35

第3篇 体细胞核转移45

7.体细胞核移植45

B 表达系统57

第4篇 表达系统57

8.酵母菌中的cDNA表达57

9.Semliki森林病毒表达系统63

10.COS-1细胞中cDNAs的瞬时表达：双相凝胶电泳的蛋白质分析69

11.大肠杆菌蛋白质的高通量纯化73

C 基因表达模型83

第5篇 差异基因表达83

12.基因表达模型的微矩阵分析：寡核苷酸微矩阵的修正作用、RNA分离、cRNA的荧光标记、杂交和扫描83

13.阵列表达：微矩阵资料的公共贮存95

14.基因表达的系列分析（SAGE）：哺乳动物细胞转录组SAGE编目的详细方案103

15.表现性差异分析：研究差异基因表达的方法113

16.单个细胞基因表达模型——多重表达荧光原位杂交：在培养细胞分析中的应用121

D 蛋白质131

第6篇 蛋白质确定和分析131

17.蛋白质确定131

18.磷酸肽作图：一个基本方案139

19.荧光标签与蛋白质的耦联145

20.蛋白质和肽的放射性碘化149

第7篇 蛋白质组学的标本组分分级157

21.自由流动场电泳157

第8篇 凝胶电泳165

22.凝胶蛋白质组学：蛋白质的高分辨双相凝胶电泳等电聚焦和非平衡pH梯度电泳165

23.高分辨双相电泳结合固定化pH梯度的蛋白质分析175

24.双向差示凝胶电泳：在多生物样本中差示蛋白表达中的应用189

25.亲和电泳研究生物特异的相互作用：用高分辨双相亲和电泳从小鼠血中分离半抗原特异的多克隆抗体成为单克隆抗体197

26.图像分析和定量207

第9篇 检测凝胶中的蛋白质219

27.银染法检测凝胶中的蛋白质：一种与质谱分析相等的方法219

28.用SYPRO染料荧光检测凝胶中的蛋白质225

29.放射自显术和荧光自显术：基于薄膜的检测平面标本放射活性的技术235

第10篇 翻译后修饰蛋白的凝胶图型分析243

30.用体内同位素标记方法对翻译后修饰蛋白质进行双相凝胶图型分析243

第11篇 蛋白质／蛋白质及蛋白质／小分子物质的相互作用253

31.在非变性条件下进行蛋白质免疫沉淀253

32.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳作为研究蛋白质相互作用的一种方法：在线粒体氧化磷酸化复合物分析中的应用259

33.天然固定化配体的亲和纯化265

34.用化学交联法分析蛋白间相互作用269

35.过氧化体靶向作用作为检测蛋白质相互作用的一种工具275

36.生物分子相互作用分析质谱术279

37.以32p标记的GST-Ras融合蛋白进行印迹重叠：在绘制蛋白质-蛋白质相互作用位点中的应用285

38.配体印迹重叠试验：检测Ca2＋和小GTP结合蛋白的技术289

39.调谐性酵母双杂交筛选295

第12篇 功能蛋白质组学307

40.用孔雀绿标记抗体进行蛋白质的发色团激光灭活307

第13篇 蛋白质／DNA相互作用317

41.染色质免疫沉淀（ChIP）317

42.凝胶泳动变位试验325

43.转录因子的DNA亲和层析：寡核苷酸捕获技术335

第14篇 蛋白质降解345

44.蛋白质降解的方法：陪伴分子介导的自噬过程345

45.蛋白质泛素化作用的方法351

第15篇 质谱分析法：蛋白质鉴定和相互作用363

46.蛋白质鉴定和序列测定的质谱方法363

47.蛋白质组特异的样本制备法用于基质激光解析／离子化质谱分析371

48.蛋白质点的凝胶内消化用于质谱分析379

49.用串联质谱法进行肽序列测定383

50.用肽的串联质谱进行直接数据库搜索391

51.利用串联质谱术和序列相似数据库搜索工具对未测基因组机体的蛋白质进行鉴定399

52.用质谱鉴定蛋白质磷酸化位点409

53.用质谱进行糖类／糖蛋白分析415

54.用稳定同位素标记氨基酸在细胞培养中进行定量蛋白质组学研究427

55.在复合肽混合液中进行半胱氨酸肽位点特异的稳定同位素标记437

56.用电喷离子质谱术测定蛋白质氢交换443

57.非凝胶蛋白质组学：从复合肽混合液中用选择反相层析分离含甲硫氨酸的肽457

58.质谱术在非共价蛋白相互作用和蛋白组装中的应用457

E469

第16篇 附录469

59.用于Silico蛋白质组分析的生物信息资源供应商名录469

供应商477

索引533