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目录3

第一篇 细胞工程的基本技术——细胞培养技术3

第一章 细胞培养的基本知识3

第一节 基本概念和名词3

第二节 细胞的特性5

一、培养细胞的形态与结构6

二、培养细胞的生长方式和类型7

三、培养细胞的生长特点和生长增殖过程8

第一节 细胞的营养14

第二章 细胞培养的条件14

一、水15

二、糖15

三、氨基酸15

四、维生素16

五、无机离子和微量元素17

六、促生长因子18

第二节 影响细胞生长的因素20

一、温度20

二、渗透压21

四、无毒和无菌22

三、气体环境和pH22

五、辐射线和超声波23

六、细胞接种浓度（密度）23

七、容器转动速度和悬浮搅动速度24

第三章 细胞培养的必备设施、常用器材和培养基25

第一节 细胞培养的必备设施25

一、无菌实验室25

二、净化工作台26

四、其他设备27

三、恒温培养箱27

第二节 细胞培养常用器材及处理方法28

一、玻璃器材28

二、塑料器材29

三、橡皮器材30

四、金属器材30

五、其他用品30

第三节 常用溶液、培养液及其配制31

一、平衡盐溶液31

二、其他溶液33

三、培养基34

第二篇 细胞工程的常用技术39

一、取材的基本要求40

第四章 原代细胞的培养与建系40

第一节 原代细胞的取材40

二、各类组织的取材技术41

第二节 原代细胞的分离和制作43

一、悬浮细胞的分离方法43

二、实体组织材料的分离方法43

三、原代细胞的培养方法47

一、原代细胞的培养与维持49

第三节 原代和传代细胞的培养和维持49

二、原代细胞培养的首次传代51

三、传代细胞的传代培养51

四、传代细胞的建系和维持52

第四节 细胞的纯化和克隆53

一、细胞的纯化53

二、细胞的克隆化56

第五章 正常细胞的培养技术60

一、上皮细胞培养60

二、中胚层细胞培养69

二、神经外胚层细胞培养88

第六章 肿瘤细胞的培养92

一、肿瘤细胞培养的生物学特性92

二、培养肿瘤细胞的生物学特性的检测94

三、肿瘤细胞的取材和培养95

第七章 细胞培养的污染及控制102

第一节 污染的类型102

一、细菌污染102

二、真菌污染102

五、非同种细胞污染103

四、病毒污染103

三、支原体污染103

第二节 污染来源及鉴别104

一、污染来源104

二、污染的鉴别105

第三节 污染的清除和预防106

一、污染的清除106

二、污染的预防107

一、概述109

第一节 细胞的冻存109

第八章 细胞的冷冻保存复苏技术109

二、主要冷冻设备和材料110

三、细胞冻存方法110

三、注意事项111

第三节 细胞的运输111

第二节 细胞的复苏111

二、细胞复苏的主要操作步骤111

一、细胞复苏的原则111

一、冷冻储存运输112

二、充液法112

第九章 培养细胞的观察与检测方法113

一、肉眼观察113

第一节 培养细胞的常规检查和观察方法113

二、显微镜观察114

三、细胞的生长状态114

四、微生物污染114

第二节 培养活细胞的观察方法115

一、相差显微镜直接观察法115

二、暗视野显微镜技术观察活细胞116

第三节 细胞固定观察法117

四、离体活细胞染色观察117

三、缩时显微镜摄影观察117

一、细胞固定基本方法118

二、常用染色方法118

三、特殊染色方法120

第四节 细胞生长状况有关指标的检测方法125

一、细胞计数125

二、细胞生长曲线和生长倍数126

三、细胞分裂指数126

五、克隆形成率127

四、细胞接种存活率127

第五节 细胞生物活性的化学检测法129

一、四氮唑盐（MTT）比色法129

二、细胞蛋白质含量测定法（考马斯亮蓝测定法）130

三、细胞蛋白质合成的3H－亮氨酸掺入试验130

四、细胞DNA合成测定法131

第六节 电镜观察法132

一、透射电镜细胞样品制备技术和观察方法132

二、扫描电镜细胞样品制备134

一、X染色质显示法139

第十章 细胞染色体显示和分带技术及其应用139

第一节 性染色质检测139

二、Y染色质显示法140

第二节 培养细胞染色体显示法140

一、原理140

二、传代细胞染色体检查141

三、微量外周血白细胞染色体检查141

二、染色体显带方法要点142

一、染色体显带种类142

第三节 染色体结构显示和检测142

四、羊水细胞培养142

三、原理143

四、常用染色体显带法143

五、姐妹染色单体分化染色144

第十一章 细胞器的分离和脱核技术146

第一节 细胞器的分离技术146

一、破碎细胞的方法146

二、部分细胞器的分离方法147

一、细胞核的分离151

第二节 细胞核的分离和细胞脱核技术151

二、细胞脱核技术152

第十二章 体外培养细胞的转化154

第一节 细胞转化的基本概念和原理154

一、细胞转化的基本概念154

二、细胞转化与恶变的区别154

三、细胞转化的方式155

四、细胞转化的基本过程155

二、细胞的选择157

三、目前常用的细胞种类157

一、诱变剂的选择157

第二节 诱变因素的选择157

第三节 细胞的转化和转化灶的分离纯化159

一、细胞的转化159

二、转化灶的分离160

三、转化细胞的筛选161

第四节 几种常用细胞转化技术实例162

一、化学致癌物的细胞转化162

二、病毒转化细胞162

一、细胞凋亡的特征164

第十三章 细胞凋亡技术164

二、细胞凋亡试验常用的方法165

三、Bcl-2凋亡基因表达的检测技术169

四、细胞凋亡的分子机制172

五、细胞凋亡的医学意义175

第十四章 细胞融合和单抗的杂交瘤技术177

第一节 细胞融合177

一、常用的细胞融合剂177

二、细胞融合方式178

第二节 单克隆抗体的杂交瘤技术179

一、基本原理179

二、技术的特点180

三、技术的应用180

四、杂交瘤细胞制备的操作程序181

第十五章 细胞毒免疫学实验技术191

一、癌细胞的杀伤研究191

二、细胞毒试验192

第十六章 药物敏感试验的细胞培养法197

二、受试细胞的准备198

一、药物的准备198

三、药效的评价199

四、药物敏感性试验的体外细胞培养法199

五、不同的抗癌药物的生物效应指标选择204

第十七章 细胞的诱导分化206

一、细胞分化的概念206

二、决定细胞分化的因素206

第十八章 病毒分离培养的细胞培养法214

一、细胞培养用于病毒研究的优点214

二、用细胞培养分离病毒215

三、病毒的鉴定技术217

四、用细胞培养法制备病毒血清学抗原224

第十九章 细胞因子的诱生与效价测定225

第一节 IL-I的诱生及检测226

一、IL1的诱生226

二、IL-1的检测方法227

第二节 IL2的诱生及检测230

一、IL-2的诱生230

二、IL-2的检测方法234

第三节 IL-3的诱生及检测238

一、IL-3的诱生239

二、IL-3的检测方法240

第四节 IL－4、IL-5的诱生及检测243

一、IL-4和IL-5的诱生243

二、IL-4的检测方法245

三、IL-5的检测方法248

第五节 IL-6、IL-7、IL－8、IL－9的诱生及检测250

一、IL-6的诱生250

二、IL6的检测方法250

四、IL－8的诱生及检测方法255

三、IL－7的诱生及检测方法255

五、IL-9的诱生及检测方法257

第六节 CSFs的诱生及检测258

一、CSFs的诱生258

二、CSFs的检测方法259

第七节 TNF的诱生及检测261

一、TNF的诱生261

二、TNF的检测方法261

一、干扰素的类型270

二、干扰素的理化性质和生物学性质270

第八节 干扰素的诱生及检测270

三、干扰素的诱生271

四、干扰素效价的测定275

第二十章 细胞基因的分离鉴定和原位杂交277

第一节 细胞DNA、RNA的分离鉴定技术277

一、培养细胞基因组DNA的提取及鉴定277

二、培养细胞总RNA的提取及鉴定278

第二节 核酸、蛋白转移电泳及杂交280

一、DNASouthernBlot及杂交280

二、RNANorthernBlot及杂交283

三、蛋白WesternBlot及分析284

第三节 细胞的原位杂交技术286

一、探针的制备原则和选择286

二、载玻片和盖玻片的预处理287

三、组织细胞固定287

四、原位杂交288

第二十一章 基因的细胞内导入技术292

一、基本概念292

二、物理化学法基因转染技术294

三、逆转录病毒载体介导DNA转染法300

四、转染细胞的鉴定304

第二十二章 流式细胞仪技术306

一、样品的制备306

二、悬浮细胞的固定307

三、流式细胞仪分析的应用307

第三篇 细胞工程的应用技术315

第二十三章 细胞的大量培养315

第一节 培养要素控制及其参数的测定317

一、大规模培养系统的类型320

第二节 细胞大量培养的类型和方法320

二、大规模生产细胞的方法321

第二十四章 干扰素和其他细胞因子的生产制备技术371

第一节 人白细胞干扰素IFN-α的生产制备方法371

一、细胞来源371

二、生产设备371

三、质量控制371

四、大罐悬浮培养法生产干扰素IFN-α372

一、生产用细胞来源373

二、细胞培养装置373

第二节 人成纤维细胞干扰素的生产制备373

三、培养基与超诱生剂374

四、人和鼠IFN-β的制备方法374

第三节 人“类淋巴细胞”干扰素的生产制备377

一、细胞来源377

二、Namalva细胞的干扰素生产378

三、大量生产的工艺378

四、生产工艺路线流程379

一、人白细胞介素－2（IL-2）诱生制备方法380

第四节 其他细胞因子的制备380

二、TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ,GM－CSF的制备382

第二十五章 病毒及其疫苗的生产制备技术383

第一节 病毒的生产383

一、病毒生产的目的和用途383

二、病毒生产的方法384

第二节 病毒疫苗的生产384

一、病毒疫苗的种类384

二、细胞培养法制备的常用疫苗385

三、用细胞培养制备病毒疫苗的优点386

四、提高疫苗效力常采用的方法387

六、生产病毒和制备病毒疫苗的常用方法388

五、影响疫苗质量的因素388

第二十六章 组织移植的活细胞制备技术392

一、LAK细胞的制备技术392

二、TIL细胞的制备技术393

第二十七章 单克隆抗体的生产技术396

一、牛淋巴液体外循环培养法396

二、微囊培养法396

三、含血清的杂交瘤细胞大量培养法397

四、无血清的杂交瘤细胞培养法397

一、在细胞生物学方面的应用400

第二十八章 细胞培养技术和细胞工程在医学中的应用400

第一节 在细胞学、胚胎学和药学方面的应用400

二、在组织胚胎学方面的应用401

三、在药物学和药理学方面的应用402

第二节 在肿瘤学方面的应用403

一、肿瘤病因和发病机制的研究403

二、抗癌药物筛选方面的研究404

三、癌基因和抑癌基因方面的研究404

四、癌细胞诱导分化和逆转方面的研究404

第三节 在免疫学中的应用405

五、癌细胞杀伤效应的研究405

一、免疫细胞表面标记和功能的常规检测406

二、白细胞分化抗原的分类和主要特征406

三、单核－吞噬细胞的培养和功能的测定417

四、免疫细胞毒试验417

五、在细胞因子的诱生和检测中的应用418

六、在HLA抗原检测中的应用426

七、在器官和组织移植免疫中的应用429

第四节 在临床各科中的应用430

一、在外科中的应用430

二、在内科中的应用431

附录433

附录1 人和动物的主要细胞系（株）433

附录2 离心速度和离心力换算表436

附录3 培养基437

附录4 细胞培养中常用名词解释438

附录5 细胞培养常用的溶液448

附录6 中国典型培养物保藏中心细胞库可供细胞目录451

附录7 中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库可供细胞目录454

附录8 细胞培养中常用术语的译名457

主要参考文献466