生物化学实验指导 第2版PDF|Epub|txt|kindle电子书版本网盘下载

生物化学实验指导 第2版PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

理论部分3

1 生物大分子的制备3

1.1 概述3

1.2　生物大分子制备的前处理5

1.2.1 生物材料的选择5

1.2.2　细胞的破碎5

1.2.3 生物大分子的提取6

1.3　生物大分子的分离纯化8

1.3.1 沉淀法8

1.3.2　透析13

1.3.3　超滤14

1.3.4　冰冻干燥16

1.3.5　样品的保存18

1.3.6　分离纯化方法的选择19

2　层析技术22

2.1　层析技术概述22

2.1.1 引言22

2.1.2　层析的基本理论22

2.1.3　层析的基本概念23

2.1.4　层析法的分类26

2.1.5　柱层析的基本装置及基本操作26

2.2　凝胶层析29

2.2.1 简介29

2.2.2　凝胶层析的基本原理29

2.2.3　凝胶层析的基本概念29

2.2.4　凝胶的种类和性质32

2.2.5　凝胶的选择、处理和保存35

2.2.6　凝胶层析的基本操作36

2.2.7　凝胶层析的应用37

2.3　离子交换层析38

2.3.1 简介38

2.3.2　基本原理39

2.3.3 离子交换剂的种类和性质40

2.3.4 离子交换剂的选择、处理和保存42

2.3.5 离子交换层析的基本操作43

2.3.6 阴离子交换树脂Q-Sepharose45

2.3.7 离子交换层析的应用47

2.4　亲和层析48

2.4.1 简介48

2.4.2　亲和层析的基本原理48

2.4.3 亲和吸附剂51

2.4.4　亲和层析的基本操作54

2.4.5 亲和层析的应用55

2.5　高效液相层析（HPLC）58

2.5.1 简介58

2.5.2 HPLC的特点59

2.5.3 HPLC的分类59

3　电泳技术62

3.1 发展简史62

3.2　电泳基本原理62

3.3　影响电泳分离的主要因素64

3.4　电泳的分类65

3.5　纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳66

3.6　琼脂糖凝胶电泳67

3.7　聚丙烯酰胺凝胶电泳68

3.8 SDS-PAGE70

3.9　梯度凝胶电泳72

3.10　等电聚焦电泳73

3.11　二维聚丙烯酰胺凝胶电泳74

3.12　蛋白质的检测、鉴定及回收75

3.13　蛋白质印迹76

3.14　毛细管电泳77

3.15　芯片毛细管电泳80

4　离心技术82

4.1 基本原理82

4.2　离心机的主要构造和类型83

4.3　超速离心技术86

4.4　离心操作的注意事项89

5　分光光度技术90

5.1　基本原理90

5.2　分光光度计的组成和构造93

5.3　分光光度法在生化实验技术中的应用97

6　免疫化学技术99

6.1　免疫化学技术简介99

6.2　抗原的免疫原性和专一性99

6.3　抗体的结构和功能101

6.4　抗原抗体的结合102

6.5　动物的常规免疫104

6.6　双向免疫扩散及免疫电泳105

6.7　酶联免疫吸附法（ELISA）107

6.7.1 间接法测抗体108

6.7.2　双抗体夹心法108

6.7.3　双位点一步法108

6.7.4　竞争法109

6.7.5　捕获法测IgM抗体109

7　其他新技术概览112

7.1　荧光技术112

7.1.1 荧光产生机制112

7.1.2 天然荧光生色团和荧光探针113

7.1.3 荧光共振能量转移113

7.2　等温滴定微量热技术115

7.2.1 等温滴定微量热（ITC）简介115

7.2.2　ITC的优点116

7.2.3 ITC的主要应用116

7.3　生物大分子相互作用分析118

7.3.1 表面等离子共振技术的原理118

7.3.2　Biacore分析系统的组成119

7.3.3　Biacore的工作原理119

7.3.4　Biacore的应用领域120

7.4　质谱技术121

7.4.1 质谱的基本原理121

7.4.2　质谱的分类122

7.4.3　质谱的应用123

7.5 圆二层析技术（CD）124

7.5.1 圆二色的基本原理124

7.5.2 圆二色仪125

7.5.3 圆二色技术的应用125

7.6　蛋白质测序技术126

7.6.1 N端测序127

7.6.2 C端测序127

实验部分131

实验1 蛋白质含量测定法131

1．微量凯氏（Kjeldahl）定氮法131

2．双缩脲法（Biuret法）132

3．Folin-酚试剂法（Lowry法）133

4．改良的简易Folin-酚试剂法135

5．考马斯亮蓝法（Bradford法）136

6．紫外吸收法138

实验2　凝胶层析法测定蛋白质分子质量141

1．实验目的141

2．实验原理141

3．器材与试剂142

4．实验操作142

实验3　等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点145

1．实验目的145

2．实验原理145

3．器材和试剂146

4．溶液配制147

5．操作步骤147

6．数据处理149

实验4　蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳150

1．SDS-PAGE的配制151

2．SDS-PAGE的灌和152

3．用考马斯亮蓝对SDS-PAGE进行染色154

4．干胶155

5．测量并计算相对分子质量155

实验5　小牛胸腺DNA的制备157

1．实验目的157

2．实验原理157

3．器材与试剂158

4．实验步骤158

实验6　小牛胸腺DNA熔解温度的测量160

1．实验目的160

2．实验原理160

3．器材与试剂161

4．操作步骤161

实验7　脱辅基血红蛋白的制备和重组163

1．实验目的163

2．实验原理163

3．实验方法163

实验8　离子交换柱层析分离核苷酸166

1．实验目的166

2．实验原理166

3．试剂与器材170

4．操作步骤170

5．结果处理172

实验9　猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定174

1．实验目的174

2．实验原理174

3．器材与试剂175

4．实验步骤176

5．注意事项177

实验10　亲和层析纯化胰蛋白酶178

1．实验目的与要求178

2．基本原理178

3．试剂与器材179

4．实验操作步骤180

5．实验结果处理183

6．参考资料184

实验11 兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质测定186

1．实验原理186

2．实验试剂187

3．实验步骤188

实验12　免疫化学实验192

1．免疫血清的制备192

2．沉淀反应定量193

3．双向免疫扩散194

4．对流免疫电泳195

5．微量免疫电泳196

6．单向定量免疫电泳（火箭电泳法）197

7．双向免疫电泳（交叉免疫电泳）198

8．酶联免疫吸附测定（ELISA）198

9．蛋白质印迹204

实验13　生物软件在生物化学实验中的应用206

1．基因序列的查找与比对206

2．蛋白质的性质分析与预测211

3．蛋白质三维结构的显示和分析219

实验14　热休克蛋白16.3的分离纯化和活性测定225

1．实验目的225

2．实验原理225

3．器材与试剂226

4．实验步骤228

5．注意事项231

附录233

1．分光光度计233

2．恒流泵操作规程236

3．自动部分收集器操作规程236

4．日立高速冷冻离心机操作程序239

5．各种仪器的使用注意事项240

6．德国耶拿（蔡司）SPECORD 200和SPEKOL-1100使用说明242

SPECORD 200使用说明242

SPEKOL-1100使用说明250

参考文献252