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第一篇　植物基因工程技术3

第一章　基因工程常用的工具酶和克隆载体3

第一节　常用的工具酶3

一、限制性内切核酸酶3

二、DNA连接酶12

三、DNA聚合酶14

四、DNA修饰酶20

五、单链内切核酸酶22

六、外切核酸酶23

第二节　基因工程中常用的克隆载体24

一、质粒克隆载体25

二、病毒（噬菌体）克隆载体40

三、染色体定位整合克隆载体65

四、启动子探针型克隆载体71

五、诱导型表达克隆载体72

六、组织特异性表达克隆载体74

七、含增强子表达克隆载体75

第二章　遗传转化体系的建立78

第一节　遗传表达载体的构建78

一、外源目的基因的取得78

二、基因克隆载体的分离提纯89

三、重组DNA分子的形成91

四、重组DNA分子（重组子）的筛选103

第二节　植物遗传转化受体系统的建立108

一、植物遗传转化受体系统的条件109

二、用于植物遗传转化受体系统的材料111

三、植物基因转化受体系统建立的程序114

第三章　遗传转化方法119

一、以载体为介导的间接转化119

二、DNA直接转化法126

三、种质系统介导基因转化132

四、植物转基因方法评价135

第四章　转基因植株的检测与鉴定137

第一节　外源基因转化的鉴定137

一、标记基因的检测137

二、PCR检测142

三、分子标记144

四、Southern杂交145

第二节　外源基因表达的检测148

一、外源基因表达在转录水平的检测148

二、外源基因表达的蛋白质水平的检测152

三、生理生化检测法161

四、生物鉴定法161

第二篇　牧草基因工程概述165

第一章　牧草基因工程的兴起与发展165

一、豆科牧草转基因研究进展165

二、禾本科牧草和草坪草基因工程研究进展170

第二章　牧草基因工程育种的目标与存在的问题175

第一节　牧草基因工程抗病育种175

一、牧草病害的种类176

二、牧草病害的防治办法177

三、牧草抗病基因工程育种179

第二节　牧草基因工程抗虫育种191

一、牧草虫害的种类191

二、虫害的防治192

三、牧草抗虫害基因工程194

第三节　抗非生物胁迫基因工程育种200

一、抗除草剂基因工程育种200

二、抗逆基因工程育种207

第四节　品质改良221

一、消化率221

二、蛋白质224

三、可溶性碳水化合物224

四、抗营养因子225

第五节　牧草转基因存在的问题226

第三篇　冰草转基因231

第一章　冰草转基因研究的历史背景与意义231

一、冰草转基因研究的历史背景231

二、冰草转基因研究的意义232

第二章　冰草组织培养再生体系的建立233

第一节 以幼穗为外植体的冰草属植物组织培养再生体系的建立233

一、材料与方法233

二、结果与分析235

三、结论241

第二节 以成熟胚为外植体的冰草属植物组织培养再生体系的建立241

一、以蒙农杂种冰草成熟胚组织培养再生体系的建立241

二、四种冰草成熟胚组织培养再生体系的建立246

第三节　冰草愈伤组织细胞悬浮培养初探249

一、材料与方法249

二、结果与分析250

三、结论251

第三章　冰草的遗传转化及分子检测253

第一节　冰草遗传转化体系的建立253

一、目的基因253

二、遗传表达载体的构建253

三、冰草的遗传转化257

第二节　转基因冰草植株的分子检测258

一、材料与方法258

二、结果与分析265

第四章　转基因冰草植株的生物学特性及抗性鉴定271

第一节　转基因冰草植株的生物学特性271

一、材料与方法271

二、结果与分析272

三、结论274

第二节　转p5CS基因冰草植株的抗旱性鉴定274

一、材料与方法274

二、结果与分析278

三、结论285

第三节　转p5CS基因冰草植株的耐盐性鉴定285

一、材料与方法285

二、结果与分析285

三、结论290

第四节　转CBF4基因冰草植株的抗旱性鉴定290

一、材料与方法290

二、结果与分析290

三、结论296

主要参考文献297

附录314

附录一　常用抗生素的配制和使用浓度314

附录二　常用培养基的配制315

附录三　野生型λDNA上限制性内切核酸酶的识别位点317