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目录2

前言2

术语缩写2

第一篇 体外免疫反应2

第一章 小鼠细胞悬液的制备 张枫2

§1-1 前言2

§1-2 脾细胞的制备2

§1-3 正常腹膜腔细胞的制备4

§1-4 经硫乙二醇刺激的腹腔细胞的制备4

§1-5 胸腺细胞的制备6

§1-6 驯化的胸腺细胞7

§1-7 可的松耐性胸腺细胞的制备7

§1-8　骨髓细胞的采取7

§1-9 淋巴结细胞的制备8

§1-10　用血细胞计数板计数细胞10

§1-11　用台盼蓝染色排斥试验决定细胞成活率12

§1-12　伊红—Y染色排斥试验决定细胞成活率12

§1-13 用苯胺黑染色决定活细胞百分率13

§1-14 A．用二乙酸荧光素计数活细胞百分率14

B．用二乙酸荧光素及蕊香红结合的抗细胞表面抗体来计数活细胞的百分率14

§1-15 用吖啶橙—溴乙啶AO/EB染色计数活性细胞百分率15

§1-16　低张力休克溶鲜红细胞16

§1-17　用Tris氯化铵缓冲液溶解红细胞17

§1-18　用Gey's溶血液溶解红细胞17

§1-19　通过Ficoll-Hypaque液离心沉淀分离细胞18

§1-20 死细胞的凝集反应19

§1-21 通过玻璃棉滤去死细胞及其碎片20

§1-22 经过FCS离心法除去死细胞20

§2-1 引言21

第二章 体液反应的诱导 许以盛、徐芸21

§2-2 悬浮培养细胞的初次免疫反应22

§2-3 扩散培养物的初次免疫反应27

§2-4 对异种红细胞的二次免疫反应31

§2-5 对硝基苯半抗原的二次免疫反应32

§2-6 对偶氮苯半抗原的二次免疫反应39

§2-7 微量悬浮培养物中的免疫反应（100微升）43

§2-8 微量扩散培养物中的免疫反应（100微升）44

§2-9 微量悬浮培养物中的免疫反应（100微升）47

第三章 溶血空斑测定法 许以盛、徐芸50

§3-1 前言50

§3-2 载玻片法（GEL）51

§3-3 平皿法（凝胶法）55

§3-4 染色和固定59

§3-5 液体基质（载玻片法）61

§3-6 液体基质（微孔法）63

§3-7 消除IgM空斑后测定IgG反应64

§3-8 抗半抗原空斑67

§3-9 用空斑测定亲和力71

§3-10 抗蛋白质空斑72

§3-11 多克隆反应的测定法77

§3-12 重复性铺板法80

§3-13 测定抗有核细胞表面抗原的IgM空斑形成细胞81

第四章 细胞介导的溶细胞反应 许以盛、徐芸89

§4-1 前言89

§4-2 溶细胞淋巴细胞的体外生成法90

§4-3 铬释放测定法91

第五章 有限稀释分析法 许以盛、徐芸99

§5-1 前言99

§5-2 B淋巴细胞前体的频度测定102

§5-4 辅助T细胞的频度103

§5-3 反应性B细胞前体细胞克隆的平均规模103

§5-5 溶细胞T细胞前体细胞的频度104

第六章 细胞增生反应 许以盛、徐芸109

§6-1 前言109

§6-2 有丝分裂因子诱导的反应110

§6-3 混合淋巴细胞反应115

§6-4 抗原诱导性T细胞增生反应116

§6-5 脾细胞培养物的放射自显影术118

第二篇 细胞分离法126

第七章 粘着法 陈宜峰126

§7-1 前言126

§7-2 葡聚糖G—10（Sephadex G—10）126

§7-3 羰基铁粉129

§7-4 尼龙纤维130

§8-1 前言134

第八章 大小和密度 陈宜峰134

§8-2 牛血清蛋白（BSA）线性密度梯度135

§8-3 牛血清蛋白（BSA）非连续密度梯度138

§8-4 胶体二氧化硅密度梯度法141

§8-5　1×g的速度沉降法143

§8-6　低速离心速度沉降法144

§8-7 形成玫瑰花结细胞的一步密度梯度分离法147

第九章　细胞表面标记 陈宜峰149

§9-1 前言149

§9-2 利用特异性抗血清和补体的方法150

§9-3 半抗原—夹心片玫瑰花结法151

§9-4 用凝集法除去玫瑰花结的方法154

§9-5 Fc和补体受体155

§9-6 花生凝集素和大豆凝集素160

§9-7 用抗Ig抗体覆盖的塑料表面，分离T细胞和B细胞的方法（“淘洗”法）162

第十章 灭活增生性细胞进行功能分离 陈宜峰167

§10-1 放射性胸苷脉冲标记法167

§10-2 5—溴—2—脱氧尿苷（BUdR）脉冲标记法169

§10-3 丝裂霉素C法170

§10-4 放射线照射法171

第三篇 细胞学研究的免疫球蛋白的制备175

第十一章 抗血清的制备和检测 石连发175

§11-1 异种抗小鼠脑血清175

§11-2 小鼠抗淋巴细胞抗原同种异体血清182

§11-3 抗半抗原血清184

§11-4 用于间接溶血空斑试验的兔抗小鼠免疫球蛋白血清185

§11-5 用于研究半抗原玫瑰花结形成、荧光标记及放射免疫沉淀的特异性兔抗小鼠Ig血清187

§11-6 放射免疫沉淀及荧光标记法检测抗鼠Ig抗血清的特异性试验190

§11-7 微量细胞毒性试验193

§11-8 半微量沉淀反应194

§11-9 抗血清的贮存195

第十二章　Ig及其片段的纯化 石连发196

§12-1 前言196

§12-2 用硫酸铵沉淀Ig196

§12-3 DEAE柱层析197

§12-4 亲和层析法提纯抗半抗原抗体198

§12-5 活性抗体片段的制备200

第十三章 抗体的标记和使用 石连发203

§13-1 前言203

§13-2 半抗原夹心法203

§13-3 荧光抗体206

§13-4 荧光染色及观察210

§13-5 抗体结合于其他大分子214

§14-2 125I的安全防护217

§14-1 前言217

第四篇 单克隆抗体及其他方法217

第十四章 双抗体放射免疫测定用于定量细胞蛋白质 石连发217

§14-3 125I标记蛋白质………………………………………………（21？§14-4 检测方法……………………………………………………………（22？第十五章 免疫学外科手术 张和君229

§15-1 前言229

§15-2 胸腺摘除术229

§15-3 皮肤移植235

§15-4 脾脏摘除237

§15-5 阉割238

§15-6 动物去嗅觉术Induction of Anosmia240

第十六章 半抗原修饰蛋白质抗原的制备 张和君242

§16-1 前言242

§16-2 氮酚类半抗原修饰钥孔？血蓝蛋白242

§16-3 三硝基苯半抗原修饰钥孔？血蓝蛋白243

§16-4 用二硝基苯半抗原修饰牛丙种球蛋白245

§17-1 前言248

第十七章 杂交瘤细胞株及培育技术248

一、产生免疫球蛋白的杂交瘤细胞株 张和君248

§17-2 细胞融合的准备250

§17-3 NS—1细胞与免疫脾细胞的融合252

§17-4 杂交瘤细胞株的选择培养（HAT选择作用）254

§17-5 杂交细胞初筛确定是否产生特异性抗体257

§17-6 转种于1毫升培养孔（转种板）和杂交细胞的冰冻保存257

§17-7 有限稀释法进行克隆259

§17-8 抗体生产260

§17-9 抗体的纯化261

§17-10 抗体的检定263

§17-11 细胞分发中心263

二、杂交细胞瘤培育技术 张和君264

§17-12 前言264

B．动物的选择265

A．实验室基本装备265

§17-13 细胞融合前的准备工作265

C．免疫266

D．骨髓瘤细胞株的选择266

§17-14 培养液的成分培养液和细胞悬液的制备267

A．100×的次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶贮存液（100×HAT）的配制267

B．营养液的配制267

C．聚乙二醇（PEG）的配制267

D．细胞悬液的配制267

§17-15 PEG作细胞融合剂268

§17-16 融合细胞的产物269

A．特异性抗体的检测269

B．抗体的贮存271

C．抗体的纯化271

B．细胞复苏273

参考文献273

§17-17 杂交瘤细胞株的冷冻保存和复苏273

A．细胞冷冻273

D．琼脂双向扩散法（OuchterlonyTest），测定免疫球蛋白的类和亚类273

三、生产单克隆抗体的战略与战术问题 张和君、郭仁274

§17-18 前言275

§17-19 材料与方法275

a．盐溶液275

b．骨髓瘤细胞株275

c．小鼠免疫276

d．腹腔内巨噬细胞的采取276

e．大孔培养276

f．微量培养法276

g．放射标记法276

h．电泳276

a．实验结果不一致的原因和防止方法277

§17-20 结果277

b．巨噬细胞在培养杂交瘤细胞株的作用278

c．不同源的巨噬细胞279

d．细胞加入的量280

e．骨髓瘤细胞株的比较280

f．融合剂的比较282

g．最好的细胞融合温度283

h．营养液的比较283

i．细胞换液的方案284

j．微量培养285

k．无血清培养液286

§17-21 结论286

四、人单克隆抗体的研究 张和君、傅家忠288

§17-22 前言288

§17-23 建立人～人杂交瘤技术289

§17-24 EB病毒转化与克隆筛选建立人单克隆抗体生产细胞系291

§17-25 人单克隆抗体研究中的有关技术292

第十八章 固相放射免疫测定……………………………………石连发297

§18-1 前言297

§18-2 同位素标记物的制备299

§18-3 固相RIA一步法：125I标记抗同种异型抗体的特异性试验301

§18-4 固相RIA两步法：抗体反应中的同型抗体及同种异型抗体的检测——对载体蛋白上二硝基苯（DNP）半抗原的反应302

§18-5 放射免疫阻断法——Ig的定量测定306

§18-6 细胞结合测定法——淋巴细胞的细胞表面抗原308

第十九章 用单相或双相聚丙烯酰胺凝胶电泳分析放射性标记的淋巴细胞蛋白质 石连发311

§19-1 前言311

§19-2 细胞蛋白质的标记和提取312

§19-3 细胞蛋白质的免疫沉淀法317

§19-4 样品的制备319

§19-5 双相聚丙烯酰胺凝胶电泳（2—D PAGE）323

§19-6 单相SDS板型凝胶电泳337

§19-7 放射自显影338

附录 许以盛 徐芸341

附录A 试剂的制备及测试法341

A-1 胎牛血清（FCS）341

A-2 补体：豚鼠和家兔血清342

A-3 平衡盐溶液（BSS）343

A-4 HEPES缓冲的平衡盐溶液345

A-5 营养合剂346

A-6 2—巯基乙醇（2—ME）346

A-7 非缓冲平衡盐溶液347

A-8 磷酸缓冲盐水（PBS）、pH7.2—7.4 10×贮存液347

A-14 Alsever氏溶液348

A-13 0.28M二甲砷酸缓冲液pH6.9348

A-12 0.15M磷酸缓冲液pH7.2—7.4348

A-11 葡萄糖磷酸缓冲盐水（G—PBS）pH7.6348

A-10 1.0M磷酸缓冲液，pH7.6348

A-9 硼酸缓冲盐水（BBS）0.17M硼酸盐，0.12M NaCl，pH8.0348

A-15 Click氏改良培养剂349

A-16 火棉胶—龙胆紫溶液350

A-17 酸化水350

附录B 实验室玻璃器皿的清洗和消毒350

B-1 用于组织培养工作的玻璃器皿的清洗351

B-2 实验室玻璃器皿的消毒351

附录C 液体试剂的消毒352

C-1 高压消毒法消毒352

C-2 用膜过滤法除菌352

附录D 透析袋的制备353

附录E 同种异体条件培养液的制备354

附录F 福氏佐剂355

附录G 制造和批发厂商356