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第一章 蛋白质分析与纯化2

第一节 蛋白质浓度测定2

一、Bradford法2

二、Lowry法测蛋白质含量3

三、紫外吸收法测蛋白质含量4

第二节 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳5

第三节 Western印迹7

第四节 蛋白质纯化9

第五节 离子交换层析11

第六节 亲和层析13

一、谷胱甘肽亲和层析14

二、金属螯合亲和层析15

三、ProteinA、ProteinG亲和层析17

第七节 疏水作用层析17

参考文献19

第二章 抗体制备技术20

第一节 多克隆抗体的制备20

双向免疫扩散法测定抗血清效价21

第二节 单克隆抗体的制备23

一、动物免疫23

二、细胞融合技术24

三、杂交瘤细胞克隆化26

四、单抗亚类测定26

五、单克隆抗体的大量制备28

参考文献28

第三章 抗体纯化和标记技术29

第一节 抗体的纯化29

一、IgG的纯化29

二、IgM的纯化33

第二节 抗体片段的制备34

一、IgG片段的纯化34

二、IgM片段的纯化37

第三节 放射性同位素标记抗体技术38

一、氯胺T法38

二、Iodogen法39

第四节 荧光素标记抗体技术40

第五节 酶标记抗体技术41

第六节 生物素标记抗体技术42

第七节 铕标记抗体技术43

第八节 胶体金标记抗体技术45

参考文献46

第四章 免疫检测技术47

第一节 免疫荧光技术47

间接细胞免疫荧光技术47

第二节 酶免疫技术49

一、双抗体夹心法检测抗原49

二、间接法测定抗体51

三、竞争法52

第三节 放射免疫技术53

一、放射免疫分析54

二、免疫放射分析55

第四节 化学发光免疫分析技术56

化学发光酶联免疫分析56

参考文献58

第五章 免疫细胞分离技术59

第一节 密度梯度分离技术59

第二节 黏附分离技术61

第三节 磁珠分离技术62

第四节 流式细胞仪分离技术64

参考文献65

第六章 细胞功能检测66

第一节 细胞增殖试验66

第二节 吞噬试验67

第三节 细胞黏附试验68

第四节 抗体依赖的细胞毒试验70

第五节 补体介导的细胞毒试验71

第六节 凋亡检测72

一、细胞凋亡的形态学检测72

二、磷脂酰丝氨酸外翻分析73

三、线粒体膜势能的检测73

四、DNA片段化检测73

五、Caspases活性的检测73

第七章 免疫组织化学和免疫电镜75

第一节 免疫组织化学75

第二节 免疫电镜77

参考文献79

第八章 细胞因子及其活性的检测80

第一节 ELISA法定量检测细胞因子80

第二节 ELISPOT法检测细胞因子分泌细胞82

第三节 流式细胞仪检测细胞内细胞因子84

第四节 细胞因子依赖细胞株检测细胞因子活性86

MTT比色分析法86

参考文献87

第九章 生物信息学简介90

第十章 核酸与蛋白质数据库93

第一节 核酸数据库93

一、子数据库及其命名94

二、核酸序列数据库格式94

三、核酸数据库的检索96

第二节 蛋白质序列数据库97

一、蛋白质序列数据库简介97

二、蛋白质序列数据库的检索99

第三节 蛋白质结构数据库105

一、PDB数据库检索106

二、PDB数据库格式107

第十一章 序列比对分析110

第一节 两序列比对分析110

一、两序列对比分析110

二、序列两两比对的数据库相似性检索分析112

第二节 多序列比对分析115

第十二章 核酸与蛋白质结构预测119

第一节 核酸结构预测119

一、核酸序列的一级结构及翻译119

二、密码子偏好性分析122

三、RNA二级结构预测125

第二节 蛋白质序列分析127

一、蛋白质一级序列分析127

二、蛋白质序列的反向翻译134

第三节 蛋白质二级结构及其预测135

一、蛋白质二级结构135

二、蛋白质二级结构预测136

第四节 蛋白质空间结构预测及常用在线预测方法139

一、蛋白质空间结构预测139

二、常用在线预测方法140

三、常用在线预测方法实例140

第十三章 蛋白质相互作用理论模拟149

第十四章 抗原表位预测154

第十五章 免疫信息学165

一、IMGT数据库165

二、KABAT数据库165

三、dbMHC165

四、AntiJen165

五、SYFPEITHI166

六、HDB166

七、MHCBN166

八、BCIPEP167

第十六章 免疫学相关重要Web网站的简介169

参考文献177

第十七章 基本分子生物学技术180

第一节 质粒DNA的分离、纯化和鉴定180

第二节DNA酶切及凝胶电泳186

第三节 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化189

第四节 RNA的提取和cDNA合成191

第五节 重组质粒的连接、转化及筛选195

第六节 基因组DNA的提取198

一、细菌基因组DNA的制备198

二、基因组DNA的检测199

参考文献199

第十八章 PCR技术200

第一节 PCR克隆基因200

第二节 PCR法进行基因突变203

第三节 PCR法全合成新基因205

参考文献208

第十九章 分子文库的构建及筛选209

第一节 cDNA文库的构建及筛选209

第二节 噬菌体展示文库的构建及筛选214

参考文献217

第二十章 分子杂交技术218

第一节 核酸探针以及制备方法218

一、双链DNA探针及其标记方法218

二、单链DNA探针220

三、末端标记DNA探针221

四、寡核苷酸探针222

五、RNA探针223

六、几种常见的非同位素标记探针的方法223

第二节 几种常见的杂交227

一、Southern杂交227

二、Northern杂交229

三、菌落原位杂交230

四、斑点杂交231

第三节 杂交反应的条件及参数的优化232

参考文献233

第二十一章 RNAi技术234

参考文献239

第二十二章 信号转导蛋白的活化水平分析242

第一节 免疫细胞化学242

第二节 激酶活性测定244

第三节 凝胶阻滞电泳247

参考文献249

第二十三章 第二信使含量测定250

第一节 Ca2+测定250

第二节 IP3的测定251

第三节 cAMP的测定253

参考文献254

第二十四章 亚细胞定位分析255

第一节 细胞分步分离法255

第二节 免疫荧光结合激光共聚焦显微镜分析256

参考文献258

第二十五章 蛋白-蛋白相互作用分析259

第一节 免疫共沉淀检测蛋白-蛋白相互作用259

第二节 GST pull down261

第三节 采用GFP和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用262

第四节 酵母双杂交264

参考文献274

第二十六章 蛋白-DNA相互作用分析275

第一节 CHIP Assay275

第二节 报道分子测定278

参考文献280

第二十七章 磷酸化多肽双向作图和磷酸氨基酸分析281

第一节 磷酸化多肽双向作图281

第二节 磷酸氨基酸分析284

参考文献287

第二十八章 蛋白质组学的双向电泳与生物质谱288

第一节 双向电泳技术288

第二节 生物质谱技术292

考马斯亮蓝染色的胶内酶切292

参考文献294