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第一篇 分子生物学实验技术及原理1

第一章 常用工具与方法1

第一节 载体1

第二节 常用工具酶9

第三节 电泳14

第二章 核酸操作技术21

第一节 DNA的定性和定量分析21

第二节 RNA的定性和定量分析30

第三节 DNA重组技术40

第四节 核酸文库构建44

第三章 蛋白质研究技术52

第一节 蛋白质分离与纯化52

第二节 蛋白质定量56

第三节 蛋白质免疫印迹61

第四节 流式细胞分析技术64

第五节 免疫共沉淀67

第四章 基因功能研究相关技术71

第一节 基因表达与调节71

第二节 转基因技术78

第三节 基因敲除81

第四节 基因沉默84

第五章 细胞研究技术88

第一节 细胞培养88

第二节 细胞凋亡的检测91

第二篇 分子生物学实验95

第六章 DNA操作实验95

实验一 质粒DNA的微量快速提取95

实验二 外周血白细胞DNA的微量快速提取（离心柱法）97

实验三 质粒DNA的酶切与鉴定98

实验四 聚合酶链反应技术（PCR）100

实验五 DNA序列测定（双脱氧测序银染法）101

实验六 DNA印迹杂交技术（Southern印迹法）106

实验七 DNA重组与鉴定110

实验八 克隆化DNA的定点突变实验113

第七章 RNA操作实验116

实验一 肝总RNA的制备116

实验二 Northern印迹法118

实验三 利用RT-PCR对大鼠肝组织SOD基因进行半定量分析121

实验四 实时荧光定量PCR（2-△△Ct法）检测大鼠不同组织中碱性成纤维细胞生长因子bFGF基因表达水平的差异123

实验五 cDNA文库构建128

第八章 蛋白质研究相关实验134

实验一 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定134

实验二 肝组织蛋白质定量136

实验三 小鼠肝β-actin蛋白免疫印迹检测140

实验四 免疫组织化学144

实验五 免疫荧光染色方法146

实验六 流式细胞仪对血小板活化的测定148

实验七 免疫共沉淀151

第九章 基因表达与调节实验154

实验一 利用荧光素酶报告基因系统检测启动子的转录活性154

实验二 染色质免疫沉淀技术156

实验三 DNA甲基化特异性PCR158

实验四 Red同源重组技术对大肠埃希菌ClpP基因的敲除162

实验五 siRNA技术沉默基因163

实验六 microRNA技术沉默基因165

第十章 转基因实验168

实验一 绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建及其在酿酒酵母中的表达168

实验二 原核表达载体构建173

实验三 哺乳动物细胞的转染178

实验四 用电穿孔方法将重组质粒转化细菌179

实验五 克隆化基因在大肠埃希菌的诱导表达180

实验六 转基因动物的建立181

第十一章 细胞研究实验185

实验一 小鼠原代细胞培养185

实验二 细胞培养实验186

实验三 细胞凋亡检测187

第三篇 分子生物学软件应用190

第十二章 PCR引物设计及相关软件使用190

第十三章 核酸序列分析与预测203

第一节 核酸序列分析一般内容203

第二节 miRNA序列数据库及靶点预测219

第十四章 蛋白质序列分析与结构预测225

第一节 蛋白质序列分析225

第二节 二级结构及三级结构预测234

第十五章 科研论文中的图片处理240

第一节 基本概念240

第二节 图片的获取与保存241

第三节 图片的修复、编排与标注242

第四节 图片的制作规范242

第五节 结语242

第十六章 EndNote软件的安装及其在医学文献管理和科研写作中的应用243

第一节 EndNote X7的安装243

第二节 EndNote X7的简介245

第三节 EndNote X7的使用247

参考文献259

附录260

附录1 分子生物学实验室常用设备介绍260

附录2 分子生物学及基因工程常用试剂276